电离辐射诱导人鼻咽癌细胞系CNE-2细胞自噬及自噬抑制与CNE-2细胞放射敏感性关系的研究

发布时间：2017-12-15 14:02

  本文关键词：电离辐射诱导人鼻咽癌细胞系CNE-2细胞自噬及自噬抑制与CNE-2细胞放射敏感性关系的研究

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【摘要】：研究目的：鼻咽癌是我国华南各省高发的恶性肿瘤之一,放射治疗被公认为鼻咽癌首选的治疗方法,近年来随着放射治疗技术的革新及各种治疗手段的综合应用,鼻咽癌治疗的疗效及预后有所改善,但鼻咽癌细胞的放射抵抗仍然是制约其疗效及预后的主要因素之一。本文通过探讨自噬现象在射线照射致人鼻咽低分化鳞癌细胞系(CNE-2)细胞死亡过程中的作用及PARP-1在射线照射所诱导CNE-2细胞自噬调控中的作用,以期寻找人鼻咽癌低分化细胞放射抗拒的可能机制,为提高鼻咽癌放射治疗敏感性提供理论依据。 方法：采用Western blotting技术检测人鼻咽低分化癌细胞系CNE-2细胞经射线照射后PARP-1、PAR、LC3-Ⅱ的变化。采用透射电子显微镜检测经不同处理后CNE-2细胞自噬小体及自噬空泡的数量；采用流式细胞术检测CNE-2细胞经不同处理后不同时间点的凋亡率；应用MTT法检测经不同处理的CNE-2细胞经射线照射后不同时间点的细胞增殖能力并计算细胞存活率；应用细胞克隆形成实验检测射线单纯照射组、自噬抑制剂磷酸氯喹(CDP)联合射线照射组、自噬诱导剂雷帕霉素(RAPA)联合射线照射组、PARP-1抑制剂3-氨基苯甲酰胺(3-AB)联合照射组不同因素处理下CNE-2细胞的存活能力及放射敏感性并拟合剂量存活曲线、计算放射生物学参数α、β、α／β和SF2值,比较各组放射敏感性。 结果：透射电镜检测结果显示电离辐射可致CNE-2细胞发生明显的自噬现象,镜下见较多自噬体及自噬空泡形成,而自噬抑制剂磷酸氯喹(CDP)抑制射线照射所致自噬体及自噬空泡的形成,自噬诱导剂雷帕霉素(RAPA)增加照射致自噬体及自噬空泡的数量(F=105.15,P0.01)。电离辐射促使自噬标志物LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化,而自噬抑制剂CDP可抑制射线引起的LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化,相反自噬诱导剂RAPA促进LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化(F=231.68,P0.01)。射线引起的PARP-1的激活,并伴随着大量PAR多聚体的形成以及LC3-Ⅱ的表达水平的升高,但PAR多聚体的形成明显早于LC3-Ⅱ的表达水平的升高,而且PAR多聚体水平在射线照射后2小时即恢复到正常水平。流式细胞术检测结果显示：与单纯射线照射组相比,自噬抑制剂CDP、自噬诱导剂RAPA或PARP-1抑制剂3-AB联合射线照射显著增加射线照射后48小时CNE-2细胞凋亡率(F=109.69,P0.01)；MTT检测结果显示：与单纯射线照射组相比CDP、RAPA或3-AB联合射线照射降低射线照射后72小时CNE-2细胞的存活率(F=50.40,P0.01)；二次线性模型拟合剂量存活曲线示自噬抑制剂CDP、自噬诱导剂RAPA、PARP-1抑制剂3-AB增加CNE-2细胞株的放射敏感性。 结论：PARP-1通过mTOR调控射线所致的自噬,自噬在射线致细胞死亡的过程中起到保护作用。射线照射联合自噬抑制剂CDP、自噬诱导剂RAPA、PARP-1抑制剂3-AB显著增加了CNE-2细胞株对射线的敏感性,提示CDP、RAPA、3-AB或可用于鼻咽癌的辅助治疗,但尚需进一步的动物实验及临床试验的验证。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R739.63

【参考文献】

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本文编号：1292195