氨基胍对兔视网膜缺血再灌注损伤的保护作用研究

发布时间：2018-11-13 18:21

【摘要】：目的 通过建立兔视网膜缺血再灌注损伤动物模型,腹腔内注射氨基胍,研究视网膜形态学变化和NO、iNOS表达的变化及氨基胍对其的影响。探讨氨基胍在视网膜缺血再灌注损伤中的作用机制,为氨基胍对视网膜缺血再灌注损伤的治疗方面的研究提供理论依据。 材料与方法 体重3±0.2kg的日本纯种大耳白兔81只,健康雄性,随机分为正常组(17只)、损伤组(32只)、治疗组(32只)三组,正常组不建立视网膜缺血再灌注损伤(retina ischemia-reperfusion injury ,RIRI)模型,损伤组和治疗组通过升高眼内压造成视网膜缺血后,再恢复正常眼内压而制作成兔RIRI模型,治疗组每日腹腔注射氨基胍注射液80mg /kg,损伤组和正常组注射等量生理盐水。损伤组和治疗组分别于缺血即时、6h、24h和72h每个时间点各取两只兔子活体行眼底照相及造影,正常组任取两只兔子行眼底照相及造影。各组分别于1h、6h、24h和72h处死余下动物摘除眼球,部分视网膜切片行HE染色,镜下观察视网膜形态变化;部分用TUNEL法检测视网膜组织细胞凋亡变化;部分视网膜通过硝酸还原酶法检测NO浓度,用比色法检测iNOS活力。结果进行图像分析,所得数据资料均用spss13.0软件包进行统计分析。 结果 1.眼底照相及荧光血管造影 正常眼底照相成橘红色,血管走行良好;高眼压后眼底颜色苍白,血管走行急剧变短,视网膜动脉闭塞;再灌注后视网膜血管扩张,呈暗红色。24h时视网膜水肿最重,可见大片白色棉絮状渗出。 正常眼底造影未见荧光素渗漏;高眼压后荧光素局限于视盘,视网膜血管未见荧光素充盈。再灌注后视网膜及视盘恢复充盈,可见荧光素渗漏。24小时荧光素渗漏达最大量。治疗组与损伤组各时间点比较:视网膜水肿程度减轻、血管闭塞程度及比例降低、荧光素渗漏量及面积减轻减少。 2.视网膜HE染色 正常组:视网膜内界膜平滑完整,三层细胞分界清楚,神经节细胞体积较大,核内染色质分布均匀。内外核层细胞均呈多层排列,细胞排列整齐紧密。 损伤组:再灌注1h组,可见视网膜组织轻度水肿; 6h组,视网膜水肿较前加重,偶见空泡变性; 24h组,视网膜全层高度水肿,各层细胞排列疏松,神经节细胞数大量减少; 72h组,视网膜水肿减轻。 治疗组:再灌注1h组,视网膜组织轻度水肿; 6h组,视网膜水肿较前加重,未见空泡变性; 24h组,视网膜各层厚度均小于损伤组,视网膜水肿程度轻于损伤组,内外核层细胞排列稍显疏松,神经节细胞数量减少; 72h组,视网膜轻度水肿。 治疗组各时间点视网膜的病理改变,均较损伤组明显减轻。 3.TUNEL染色凋亡细胞计数和定位 正常组未见凋亡阳性细胞表达。损伤组再灌注1h,凋亡阳性细胞微量表达;6h组阳性细胞表达增多;24h阳性细胞表达达高峰,72h细胞凋亡表达明显减少。治疗组凋亡阳性细胞表达趋势基本同损伤组,但表达量明显减少。同一时间下,视网膜凋亡细胞计数治疗组均低于损伤组(p0.05)。同一组内(损伤组和治疗组)相邻时间之间凋亡细胞计数差异有统计学意义(p0.05),24h凋亡细胞数量达高峰。 4.NO浓度的改变 正常组兔视网膜中检测到N O少量的表达。损伤组和治疗组1h,N O浓度逐渐增高,6h N O浓度继续增高,至2 4h达到最高,后开始减弱,7 2h NO浓度仍高于正常水平。同一时间下,视网膜NO含量治疗组均低于损伤组(p0.05)。同一组内(损伤组和治疗组)相邻时间之间NO含量差异有统计学意义(p0.05),24hNO含量达高峰。 5.iNOS活力的改变 正常组兔视网膜中均未能检测到i N O S的表达。损伤组和治疗组1h,视网膜中检测到i N O S的微量表达, 6h开始有i N O S的表达,并逐渐加强,至2 4h达到最强,后开始减弱,7 2h仍可见到i N O S的表达。同一时间下,视网膜i N O S活力治疗均低于损伤组(p0.05)。同一组内(损伤组和治疗组)相邻时间之间i N O S活力差异有统计学意义(p0.05),24hi N O S活力达高峰。 结论 氨基胍治疗组各时间点视网膜的病理改变均较损伤组明显减轻,提示氨基胍能够减轻视网膜缺血再灌注损伤,对维持视网膜的形态和功能起到重要作用;氨基胍治疗能减少凋亡阳性细胞表达;视网膜缺血再灌注损伤可引起NO浓度和iNOS活性的升高,氨基胍注射液可能通过抑制iNOS的活性,减少NO的生成来实现其对RIRI的保护作用。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：河北联合大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R774.1

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本文编号：2330045