LY294002对bFGF诱导的兔眼晶状体上皮细胞增殖的影响

发布时间：2019-05-10 04:53

【摘要】： 目的随着白内障手术的不断完善,以往的白内障手术并发症,如：玻璃体前界膜破裂致玻璃体脱出、角膜失代偿、虹膜睫状体炎、眼内炎、青光眼、人工晶状体脱位及半脱位等已明显减少,而晶状体后囊膜混浊(Posterier Capsuler Opacification, PCO)已成为现代白内障手术(囊外摘除及人工晶体植入)术后的主要并发症之一。多年来预防后发障发生的研究主要集中在抑制残留的晶体上皮细胞继续增殖和迁移。其中包括非药物性和药物性两个方面。因非药物性抑制晶体上皮细胞生长繁殖的研究没能得出满意的结果,目前的研究则主要集中在药物抑制晶状体上皮细胞增殖。而近些年研究的一些药物,如：抗代谢药物,天然草药,组织纤溶酶原激活剂,抗炎药,免疫毒素及细胞毒素等均因其毒副作用较强而未应用于临床。近几年的研究则侧重于通过不同途径影响bFGF的促增殖作用而抑制晶状体上皮细胞的增殖和迁移。 LY294002为磷酸肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)通道抑制剂,PI3K是许多生命活动中关键的信号分子,参与调节细胞的分裂、分化、凋亡等活动,并已报道其也参与LECs的增殖。丝氨酸/苏氨酸激酶AKT(serine/theonine kinase AKT,又称为PKB)是PI3K下游直接的靶蛋白,AKT是一种多功能调节因子,参与细胞生存和凋亡的调控。多种生长因子都能通过生长因子受体上酪氨酸(Y740/Y751)位点磷酸化后产生与PI3K的p85亚基结合的高亲和位点,诱导PKB的激活,此激活过程能被PI3K特异抑制齐刂wortmannin及LY294002所阻断。主要机制为wortmannin及LY294002与PI3K的p110亚基呈非竞争性不可逆性结合,从而阻断下游AKT的激活,起到抑制细胞增殖和迁移的作用。磷酸肌醇3激酶(PI3K)通道抑制剂的毒副作用较小有望成为预防PCO的理想药物。本实验将不同浓度的LY294002加入体外培养的兔晶状体上皮细胞干预其增殖。通过MTT检测细胞抑制率及流式细胞仪分析细胞周期。观察LY294002对兔眼晶状体上皮细胞的抑制程度及对bFGF促进增殖作用的影响。材料与方法体外培养的兔晶状体上皮细胞分为实验组和对照组,其中对照组包括空白对照和bFGF对照组,实验组包括单独用LY294002和联合用bFGF组,空白对照组为不含血清的DMEM培养液,bFGF对照组为空白对照这组+bFGF (10ng/mL),药物处理组分为两组：①5个单独用药组(10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L、10-4mol/L)；②5个联合用药组(10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L、10-4mol/L)+bFGF (10ng/mL)。取生长良好的第3代兔LEC细胞传代于培养板及培养瓶中,常规培养后,按上述分组加入不同浓度药物,培养48小时后MTT检测抑制率及流式细胞仪检测细胞周期。结果 1.MTT检测LY294002对LEC增殖的抑制作用在单独应用LY294002组内,各LY294002组与空白对照组相比显示：10-8mol/L作用48h后对兔LECs无明显抑制作用(P0.01),10-4、10-5、10-6、10-7mol/L浓度作用48h后均对兔LECs有明显的抑制作用(P0.01)；各联合用药组与阳性对照组相比,10-8 mol/L作用48 h后对兔LECs有轻微抑制作用(P=0.008),10-4、10-5、10-6、10-7mol/L作用48 h后均对兔LECs有明显的抑制作用(P0.01)；空白对照组与阳性对照组相比差异有统计学意义(P0.01)。 2.LY294002对兔LEC的细胞周期的影响兔LEC经LY294002作用48h后,实验组与对照组相比,G0/G1期细胞增多,而S期和G2/M期细胞减少。细胞G0/G1期分析示：LY294002组,10-8mol/L浓度作用48 h后,与空白对照组相比对兔LECs无明显抑制作用(P0.01); 10-4、10-5、10-6、10-7mol/L作用48h后,与空白对照组相比对兔LECs均有明显的抑制作用(P0.01)；联合用药组内,10-8 mol/L浓度作用48h后,与阳性对照组相比对兔LECs无明显抑制作用(P0.01),10-4、10-5、10-6、10-7mol/L浓度作用48h后,与阳性对照组相比对兔LECs均有明显的抑制作用(P0.01)；空白对照组与阳性对照组相比差异有统计学意义(P0.01),S期及G2/M期分析结果大致同G0/G1期。结论 1.LY294002能抑制兔眼晶状体上皮细胞的增殖。 2.bFGF能促进兔眼晶状体上皮细胞的增殖,并作用后处于增殖期的兔眼晶状体上皮细胞明显增多。 3.高浓度LY294002能将bFGF的促细胞增殖作用阻断,并作用后处于增殖期的兔眼晶状体上皮细胞明显减少而静止期细胞明显增多。
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【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R776.1

【参考文献】