鼻咽癌组织中LEF1和TCF1（TCF7）蛋白的表达及其临床意义的研究

发布时间：2020-03-22 18:43

【摘要】：研究背景:鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是一种EB病毒(Epstein-Barr virus)相关的头颈部肿瘤,具有种族差异和地域分布差异,主要发生于东亚、东南亚及北非国家。据流行病学估计,2013年中国鼻咽癌新发病例及死亡病例分别为42100人、21320人,分别占当年癌症新发人数和死亡人数的1.14%及0.96%。随着鼻咽癌早期诊断和放化疗为主的综合治疗措施的完善,大多数鼻咽癌患者的病情能得到有效控制,但仍有少部分患者对放化疗抵抗或治疗后复发和远处转移,导致治疗效果不佳。经典的Wnt/β-catenin信号通路与人类多种恶性肿瘤的发生与演进密切相关,其下游核心分子β-catenin具有双重作用。正常情况下,β-catenin水平受负性降解复合体(Axin、APC、GSK3β、CK1α)调节,β-catenin被GSK3β磷酸化后,可被泛素蛋白酶体降解;由于缺少β-catenin,LEF/TCF能利用自身的HMG盒与其他蛋白结合,不发挥转录激活作用,亦可通过转录阻抑蛋白结合靶基因启动子,从而抑制靶基因转录。当Wnt与Frizzed和LRP5/6受体结合后,GSK3β的活性被抑制,从而抑制β-catenin磷酸化,导致β-catenin在细胞核内聚集,激活LEF/TCF转录复合体,上调其下游CCND1、MMP7、MYCL1、和AXIN2等基因的表达,从而抑制肿瘤细胞凋亡,促进肿瘤细胞增殖、侵袭和转移。LEF/TCF作为经典的Wnt/β-catenin信号通路的重要组成部分,在人类多种恶性肿瘤中都存在异常。免疫组织化学技术(Immunohistochemistry,IHC)检测LEF和TCF蛋白的表达主要集中在结直肠癌、白血病、乳腺癌等恶性肿瘤。仅极少数文献报道LEF1及TCF1(TCF7)蛋白在鼻咽癌组织中存在异常表达。查阅近年的文献,目前没有检索到运用IHC手段同时检测和研究LEF1和TCF1(TCF7)蛋白在鼻咽癌组织中表达的相关报道。基于上述研究背景,本课题收集了391例鼻咽癌组织、53例非癌患者的鼻咽粘膜组织及28对(56例)鼻咽原发癌及其相匹配的鼻咽转移癌组织,IHC分别检测LEF1、TCF1(TCF7)蛋白在鼻咽癌组织及非癌鼻咽粘膜组织中单独及共同表达水平、在鼻咽原发癌和其相匹配的转移癌组织中的单独及共同表达水平,多种统计学方法分析LEF1和TCF1(TCF7)蛋白单独表达和共同表达水平与鼻咽癌患者临床病理特征的关系,旨在初步探讨LEF1和TCF1(TCF7)蛋白在鼻咽癌发生、发展中的作用,分析评估其能否作为鼻咽癌诊断、治疗和预后判断的新型独立分子标志物。研究方法:随机抽取中南大学湘雅二医院病理科组织标本库中2000年1月至2009年12月间391例鼻咽癌组织、53例非癌患者的鼻咽粘膜组织和28对(56例)鼻咽原发癌及其相匹配的鼻咽转移癌组织,所有鼻咽癌患者均具有完整的临床随访资料,而且全部患者活检前均未进行化疗或放疗。IHC检测LEF1和TCF1(TCF7)蛋白在鼻咽癌、非癌鼻咽粘膜、鼻咽原发癌和其相匹配的鼻咽转移癌组织中的表达(单独表达及共同表达),以LEF1和TCF1(TCF7)阳性表达的喉部低分化鳞状细胞癌组织作为每次实验的阳性对照,PBS代替一抗作为每次实验的阴性对照。多种高级统计学方法分析鼻咽癌组织中LEF1和TCF1(TCF7)蛋白的表达水平及其与鼻咽癌患者临床病理特征和预后的相关性。以双侧检验水准,P0.05确定差异具有统计学意义。结果:(1)鼻咽癌组织中LEF1和TCF1(TCF7)蛋白的表达水平(单独表达及共同表达)均明显高于非癌鼻咽粘膜组织(P0.001、P0.001、P0.001)。(2)LEF1蛋白阳性表达的鼻咽癌患者容易发生淋巴结转移(P=0.001),其临床分期更晚(P0.001),死亡率更高(P0.001)。但TCF1(TCF7)蛋白表达与鼻咽癌患者的性别、年龄、组织学分型、淋巴结转移、临床分期以及生存状态均无显著相关性(P0.05)。(3)LEF1和TCF1(TCF7)蛋白共同阳性的鼻咽癌患者容易发生淋巴结转移(P=0.020),其临床分期更晚(P=0.027),死亡率更高(P=0.004)。(4)鼻咽转移癌组织中LEF1蛋白阳性率及LEF1、TCF1(TCF7)蛋白共同阳性表达率显著高于其匹配的鼻咽原发癌(P0.001、P=0.003)。(5)鼻咽癌组织中LEF1与TCF1(TCF7)蛋白的表达呈显著正相关(r=0.103,P0.030)。(6)Kaplan-Meier生存曲线和log-rank检验分析结果显示:LEF1蛋白阳性及LEF1和TCF1(TCF7)蛋白共同阳性的鼻咽癌患者总生存时间短(P0.001,P=0.002),但TCF1(TCF7)蛋白表达与鼻咽癌患者的总生存时间无统计学相关性(P=0.416)。(7)多因素Cox风险回归分析结果显示:除鼻咽癌的临床分期和淋巴结转移外(P=0.047、P=0.019),LEF1蛋白可作为判断鼻咽癌患者预后的独立分子标志物(P0.001)。结论:1、鼻咽癌组织中LEF1、TCF1(TCF7)蛋白表达水平(单独表达及共同表达)均显著高于非癌鼻咽粘膜组织,且二者在鼻咽癌组织中的表达呈正相关,提示LEF1和TCF1(TCF7)蛋白可能协同促进鼻咽癌的发生。2、鼻咽转移癌组织中LEF1蛋白表达显著高于其匹配的鼻咽原发癌;LEF1蛋白阳性及LEF1和TCF1(TCF7)蛋白共同阳性的鼻咽癌患者容易发生淋巴结转移,总生存时间短,提示LEF1和TCF1(TCF7)蛋白可能具有促进鼻咽癌临床进展的作用,患者预后差。3、LEF1蛋白有可能作为独立判断鼻咽癌预后的新型分子标志物。
【图文】：

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新疆医科大学硕士学位论文13图1 具有完整临床资料及随访资料的391例鼻咽癌病人信息（部分）2.2.2 H&E 染色方法（1）烤片：切片置于75℃烤箱内，等待35分钟以上使石蜡彻底熔解。（2）脱蜡及水化：切片按照以下顺序依次经过：松节油Ⅰ10分钟松节油Ⅱ 10分钟无水乙醇5分钟 75%乙醇5分钟自来水蒸馏水5分钟（注意：应迅速将切片从烤箱中拿出放入松节油，以免切片冷却影响脱蜡效果）。（3）细胞核染色：切片置于苏木素中染色8分钟，自来水清洗5分钟后放入1%盐酸酒精内2秒钟，再用自来水洗5分钟（根据苏木素使用时间、次数、当日室温等，苏木素染色时间可相应延长或缩短）。（4）细胞浆染色：切片置于0.5%伊红酒精溶液染色5秒钟，自来水冲洗5分钟。（5）脱水、封片：沥干切片上的自来水，，将切片置于梯度乙醇及松节油中脱水并透明：70%乙醇2分钟 80%乙醇2分钟 95%乙醇2分钟无水乙醇Ⅰ 2分钟无水乙醇Ⅱ 2分钟松节油Ⅰ 10分钟松节油Ⅱ 10分钟

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18图2 IHC检测LEF1蛋白在鼻咽癌和非癌鼻咽粘膜组织中的表达情况LEF1 蛋白实验浓度为 1:50；鼻咽癌（A.+++;B.++;C.+;D.-）；非癌鼻咽粘膜组织（E.+;F.-）;（IHC，DAB 显色，200×）。
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.63

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