牛眼小梁细胞与视网膜色素上皮细胞共培养体系在缺氧条件下ET-1和VEGF的表达及相互关系

发布时间：2020-03-27 12:09

【摘要】：背景新生血管性青光眼(neovascularglaucoma,NVG)是一组以虹膜和房角新生血管为主要特点的难治性青光眼。其病因主要是长期的视网膜供血供氧不足、炎症或手术外伤等,大多继发于血管阻塞性疾病和糖尿病视网膜病变,是一种破坏性极强可致盲眼病。NVG的形成是逐渐发展变化的过程,虹膜新生血管(iris neovascularization,NVI)的形成是NVG发生的前提,即NVI不及时治疗会进展为房角关闭,诱发眼压升高而继发NVG。大量研究证实,新生血管性青光眼患者的血浆及房水中ET-1及VEGF水平均升高,但具体关系尚不清楚。目的探讨缺氧条件下TM与RPE共培养体系中ET-1与VEGF表达量的变化及相互关系。方法分别采取改良组织块培养法和胰酶消化法提取新鲜牛眼小梁细胞及牛眼视网膜色素上皮细胞,根据细胞形态鉴定TM和RPE。将第3代TM细胞接种于6孔Transwell小室下层,将第3代牛眼RPE细胞接种于6孔Transwell小室上层并分为正常对照组、单纯缺氧组、缺氧+ET-1拮抗剂组、缺氧+VEGF拮抗剂组,分别在2ml培养基中加入40μlPBS、40μlCoCl2工作液(终浓度为200μmol/L)、40μlCoCl2工作液(终浓度为200μmol/L)+2μl内皮素受体拮抗剂工作液(终浓度为 10-5μmol/L)、40μlCoCl2工作液(终浓度为 200 μmol/L)+20 μlVEGF 受体拮抗剂工作液(终浓度为10-8μmol/L),继续培养24h。选用RT-PCR检测各组细胞内ET-1 mRNA和VEGF mRNA的相对表达量;选用免疫细胞化学法检测各组细胞内抗原水平量的变化。结果RT-PCR检测结果显示,ET-1 mRNA的相对表达量正常对照组为0.90 ±0.15、缺氧组为1.77±0.08、缺氧+抗ET-1受体拮抗剂组为0.54±0.04、缺氧+抗VEGF受体拮抗剂组为1.26 ±0.09,每两组之间差异均有统计学意义(P0.05)。VEGFmRNA的相对表达量对照组为0.99±0.01、缺氧组为1.68±0.06、缺氧+ET-1受体拮抗剂组为1.26 ±0.07、缺氧+VEGF受体拮抗剂组为0.59 ±0.04,每两组之间差异均有统计学意义(P0.05)。免疫细胞化学结果显示,ET-1阳性目标积分光密度对照组为44167 ±727.9、缺氧组为80288 ±960、缺氧+ET-1受体拮抗剂组为35672 ± 1090、缺氧+VEGF受体拮抗剂组为54294 ± 1304,每两组之间差异均有统计学意义(P0.05)。表3-4结果显示,VEGF阳性目标积分光密度对照组为228264 ± 10021、缺氧组为418205 ± 23377、缺氧+抗ET-1受体拮抗剂组为377198 ± 37025、缺氧+抗VEGF受体拮抗剂组为53873 ±9662,每两组之间差异均有统计学意义(P0.05)。结论牛眼小梁细胞和视网膜色素上皮细胞共培养体系在缺氧条件下ET-1及VEGF表达水平均上调,分别加入ET-1和VEGF受体拮抗剂后对对方和自身因子的表达呈现不同程度下调作用,推测在新生血管性青光眼发病过程中ET-1和VEGF之间存在协同作用。
【图文】：

滨州医学院硕士学位论文逡逑全文附图逡逑图１－１原代培养的牛眼小梁细胞（Ｘ邋１００）图１－２原代培养的牛眼色素上皮细胞（Ｘ邋１００）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－１邋ｐｒｉｍａｒｙ邋ｃｕｌｔｕｒｅｄ邋ｂｏｖｉｎｅ邋ｔｒａｂｅｃｕｌａｒ邋ｍｅｓｈｗｏｒｋ邋ｃｅｌｌｓ邋（ｘ邋１００）邋Ｆｉｇｕｒｅ邋１－２邋ｐｒｉｍａｒｙ邋ｃｕｌｔｕｒｅｄ逡逑ｂｏｖｉｎｅ邋ｒｅｔｉｎａｌ邋ｐｉｇｍｅｎｔ邋ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ邋ｃｅｌｌｓ邋（ｘｌＯＯ）逡逑Ｈｉ逡逑图１－３第三代培养的牛眼小梁细胞（Ｘ４００）图１－４第三代培养的牛眼视网膜色素上皮细胞逡逑（Ｘ４００）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－３邋ｔｈｅ邋ｔｈｉｒｄ邋ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｃｕｌｔｕｒｅｄ邋ＢＴＭＣｓ邋（ｘ邋４００）邋Ｆｉｇｕｒｅ邋１－４邋ｔｈｅ邋ｔｈｉｒｄ邋ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ邋ｏｆ逡逑ｃｕｌｔｕｒｅｄ邋ｂｏｖｉｎｅ邋ＲＰＥ邋

滨州医学院硕士学位论文逡逑全文附图逡逑图１－１原代培养的牛眼小梁细胞（Ｘ邋１００）图１－２原代培养的牛眼色素上皮细胞（Ｘ邋１００）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－１邋ｐｒｉｍａｒｙ邋ｃｕｌｔｕｒｅｄ邋ｂｏｖｉｎｅ邋ｔｒａｂｅｃｕｌａｒ邋ｍｅｓｈｗｏｒｋ邋ｃｅｌｌｓ邋（ｘ邋１００）邋Ｆｉｇｕｒｅ邋１－２邋ｐｒｉｍａｒｙ邋ｃｕｌｔｕｒｅｄ逡逑ｂｏｖｉｎｅ邋ｒｅｔｉｎａｌ邋ｐｉｇｍｅｎｔ邋ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ邋ｃｅｌｌｓ邋（ｘｌＯＯ）逡逑Ｈｉ逡逑图１－３第三代培养的牛眼小梁细胞（Ｘ４００）图１－４第三代培养的牛眼视网膜色素上皮细胞逡逑（Ｘ４００）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－３邋ｔｈｅ邋ｔｈｉｒｄ邋ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｃｕｌｔｕｒｅｄ邋ＢＴＭＣｓ邋（ｘ邋４００）邋Ｆｉｇｕｒｅ邋１－４邋ｔｈｅ邋ｔｈｉｒｄ邋ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ邋ｏｆ逡逑ｃｕｌｔｕｒｅｄ邋ｂｏｖｉｎｅ邋ＲＰＥ邋
【学位授予单位】：滨州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R775

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 濮清岚;吴瑜瑜;林玲;何艳;;肿瘤坏死因子-α对体外培养的人眼小梁细胞基质金属蛋白酶-3和基层金属蛋白酶-9表达的影响[J];眼视光学杂志;2007年04期

2 胡义珍;张海江;熊新春;曹阳;;组织型谷氨酰胺转移酶在牛眼小梁细胞中的表达及意义[J];眼科研究;2005年06期

3 贺翔鸽,李美玉;地塞米松体外抑制人眼小梁细胞生长及表皮生长因子mRNA的表达[J];中华眼科杂志;2001年01期

4 刘涛,张德秀,刘勇,王力,丁海燕;小梁细胞体外培养技术的建立及细胞骨架的形态学观察[J];航空航天医药;2000年03期

5 贺翔鸽,李美玉;人眼小梁细胞培养及免疫组化特性研究[J];中华眼科杂志;1998年04期

6 戴惟葭,赵烨德;核仁组成区嗜银蛋白染色在人眼小梁细胞生长研究中的应用[J];眼科研究;1999年01期

7 钟丽春,李美玉;转化生长因子-β_1对培养的人眼小梁细胞微丝肌动蛋白的影响[J];中华眼科杂志;1999年03期

8 杨新光,张东杲,李美玉;小梁细胞在吞噬过程中自身受损伤的研究[J];眼外伤职业眼病杂志(附眼科手术);1996年04期

9 尤毓陆，贺圣光，黄旭东，，尤敏，刘晓芳;人眼小梁细胞组织培养及超微结构观察[J];潍坊医学院学报;1996年02期

10 贺翔鸽,李美玉;人眼小梁细胞体外表达表皮生长因子mRNA和表皮生长因子受体[J];中华眼科杂志;1997年06期

相关会议论文 前9条

1 卓业鸿;侯飞;王莉娜;黄亚琳;葛坚;;地塞米松对人眼小梁细胞连接蛋白表达和细胞骨架的影响研究[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年

2 卓业鸿;侯飞;魏雁涛;李亮;王莉娜;葛坚;;地塞米松对人眼小梁细胞连接蛋白表达的影响研究[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年

3 刘旭阳;;The Cytoskeleton of Trabecular Meshwork and Glaucoma Treatment[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年

4 刘旭阳;陈晓明;李妮;余曼;;Rho激酶抑制剂H—1152对人眼小梁细胞形态及细胞骨架影响[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年

5 孙静;;地塞米松对人眼小梁细胞RhoGDI和RhoA蛋白表达的影响[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年

6 袁洪峰;贺翔鸽;;NF—κB对人眼小梁细胞TIGR基因表达调控的影响[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年

7 刘娅利;刘旭阳;陈晓明;;糖皮质激素和Rho激酶抑制剂Y-27632对体外培养的人小梁细胞及细胞骨架的影响[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年

8 袁洪峰;贺翔鸽;;NF—κB对人眼小梁细胞凋亡的影响[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年

9 王锦屏;王雪丁;曾淑君;;抗青光眼药物与小梁网细胞凋亡的研究[A];海峡两岸三地药理学学术报告会论文汇编[C];2001年

相关博士学位论文 前7条

1 周崎;内皮细胞白细胞黏附分子-1在小梁细胞的表达和作用研究[D];中国协和医科大学;2004年

2 李妮;Rho激酶抑制剂H-1152降眼压作用的实验研究[D];四川大学;2007年

3 袁洪峰;核因子-κB对人眼小梁细胞生长及分泌功能影响的实验研究[D];第三军医大学;2006年

4 王霁雪;氯离子通道在小梁网表达及相关功能的实验研究[D];吉林大学;2010年

5 曾红艳;青光安颗粒剂对体外培养小梁细胞凋亡相关基因产物和细胞外基质作用的研究[D];湖南中医药大学;2007年

6 林芳宇;基于CRISPR/Cas9敲除小梁细胞Atg7后细胞外基质的改变及Melatonin对睫状体上皮CT流的影响[D];浙江大学;2016年

7 吕瀛娟;维生素D与原发性开角型青光眼发病的相关性研究[D];天津医科大学;2017年

相关硕士学位论文 前10条

1 孟杰;牛眼小梁细胞与视网膜色素上皮细胞共培养体系在缺氧条件下ET-1和VEGF的表达及相互关系[D];滨州医学院;2018年

2 章艳;体外培养人眼小梁细胞血管紧张素Ⅱ的表达[D];华中科技大学;2008年

3 李超;白细胞介素-1β对人眼小梁细胞基质金属蛋白酶-3表达的影响[D];福建医科大学;2008年

4 徐慧;牛眼小梁细胞体外高压培养模型的建立及中药滴明眼液有效部位配比研究[D];成都中医药大学;2006年

5 苏静;莱菔硫烷对体外培养牛眼小梁细胞氧还蛋白表达的影响及其机制研究[D];滨州医学院;2016年

6 郑红梅;体外培养的牛眼小梁细胞血管紧张素转换酶的表达[D];华中科技大学;2008年

7 王盈盈;茶多酚对POAG来源的小梁细胞抗氧化损伤的实验研究[D];南昌大学;2013年

8 陈慧;雄激素促进组织型谷氨酰胺转移酶表达与原发性开角型青光眼的发病关系的研究[D];华中科技大学;2007年

9 郭黎霞;正常人和急性闭角型青光眼患者小梁网中一氧化氮合酶的表达[D];河北医科大学;2004年

10 乔羽;c-Ski基因对小梁通道房水外流阻力的调控及机制研究[D];泸州医学院;2013年

本文编号：2602935