SDF2L1在鼻咽癌中的表达及其对鼻咽癌细胞生物学功能的影响

发布时间：2020-05-13 04:46

【摘要】：目的:鼻咽癌在我国广东和广西发病率高,其起病隐蔽、恶性程度高、易发生转移,严重威胁到了患者的身体健康。近几年来,大量研究发现抑癌基因的失活是鼻咽癌发生、发展的重要因素。研究发现基质细胞衍生因子2样1(Stromal cell derived factor 2 like 1,SDF2L1)的表达下调与肿瘤的发生、预后有关。本研究主要探讨SDF2L1在鼻咽癌中的表达情况以及对鼻咽癌细胞生物学功能的影响。方法:1、应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和免疫组化方法来检测鼻咽癌组织和鼻咽粘膜慢性炎组织中SDF2L1 mRNA和蛋白的表达水平,并分析其与临床病理特征的关系。2、应用qRT-PCR和蛋白印迹法(Western blotting,WB)检测人永生化鼻咽上皮NP69细胞和鼻咽癌CNE1、CNE2Z细胞中SDF2L1mRNA和蛋白的表达水平。3、利用慢病毒载体介导的RNA干扰技术,分别转染CNE1细胞并经嘌呤霉素筛选,其中转有针对SDF2L1干扰片段的细胞为实验组,转有空载片段的细胞为空载组,未转染的CNE1细胞为对照组,并用WB检测各组SDF2L1蛋白的表达水平。4.采用MTT实验和细胞克隆形成实验来评价沉默SDF2L1对CNE1细胞增殖能力的影响。5、应用细胞划痕、Transwell迁移、Transwell侵袭实验来检测SDF2L1表达沉默对CNE1细胞迁移、侵袭能力的影响。6、应用qRT-PCR检测各组细胞中E-钙粘蛋白、N-钙粘蛋白及基质金属蛋白酶-9的mRNA相对表达量。结果:1、12例鼻咽癌组织和12例鼻咽粘膜慢性炎组织中SDF2L1mRNA的相对表达量分别为0.549?0.568,1.254?0.729。相对于鼻咽粘膜慢性炎组织,鼻咽癌组织中SDF2L1mRNA的相对表达量明显降低,两者比较差别有统计学意义((49)(27)0.05)。SDF2L1蛋白在鼻咽癌组织中表达的阳性率为20.6%(20/97),明显低于其在鼻咽粘膜慢性炎组织中表达的阳性率91.4%(53/58),差异有统计学意义((49)(27)0.05)。SDF2L1蛋白在鼻咽癌组织中的表达与临床病理参数无明显相关((49)(29)0.05)。2、SDF2L1 mRNA在NP69、CNE1、CNE2Z细胞中的相对表达量分别为1.006?0.137、0.638?0.048、0.287?0.016;蛋白在NP69、CNE1、CNE2Z细胞中的相对表达量分别为0.980?0.019、0.932?0.025、0.517?0.036,鼻咽癌CNE1和CNE2Z细胞中SDF2L1 mRNA和蛋白水平表达均明显低于NP69,差异有统计学意义((49)均(27)0.05)。3、SDF2L1蛋白在实验组、空载组、对照组中的相对表达量分别为0.280?0.039、0.935?0.034、0.926?0.031,实验组中SDF2L1蛋白水平表达均明显低于空载组和对照组,差异有统计学意义((49)(27)0.05)。4、MTT实验显示,实验组、空载组、对照组细胞培养96h的OD值分别为1.135?0.013、1.149?0.021、1.127?0.019,各组细胞增殖能力无明显差异,结果无统计学意义((49)均(29)0.05)。细胞克隆形成实验中,实验组、空载组、对照组的细胞克隆形成率分别为(60.4?6.39)%、(58.67?5.75)%、(59.41?5.02)%,三组比较无明显差异,结果无统计学意义((49)均(29)0.05)。5、细胞划痕实验中,实验组、空载组、对照组中细胞相对迁移率为(72.79?0.96)%、(53.06?0.74)%、(52.38?0.65)%,实验组中细胞相对迁移率明显高于空载组和对照组,差异有统计学意义((49)均(27)0.05)。Transwell迁移实验中,实验组、空载组、对照组穿入下室的细胞数分别为331?7、254?13、242?9个,实验组穿入下室的细胞数均明显高于空载组和对照组,差别有统计学意义(P均0.05)。Transwell侵袭实验中,实验组、空载组、对照组穿入下室的细胞数分别为221?10、140?9、146?7个,实验组穿入下室的细胞数均明显高于空载组和对照组,结果有统计学意义(P均0.05)。6、与空载组、对照组相比,实验组中的E-钙粘蛋白mRNA相对表达量显著降低(P均(27)0.05),基质金属蛋白酶-9 mRNA相对表达量明显升高(P均(27)0.05),而N-钙粘蛋白mRNA相对表达量无明显改变(P(29)0.05)。结论:1、SDF2L1mRNA和蛋白水平在鼻咽癌组织及细胞中的表达下调,与鼻咽癌的临床病理特征无明显的相关。2、成功建立了SDF2L1表达沉默的鼻咽癌CNE1细胞株。3、SDF2L1表达沉默可促进鼻咽癌细胞的迁移和侵袭,而对鼻咽癌细胞的增殖能力无明显影响。4、鼻咽癌细胞株SDF2L1低表达导致与EMT有关的E-钙粘蛋白及基质金属蛋白酶-9表达改变,提示SDF2L1表达下调可能是鼻咽癌发生浸润、远处转移的分子标志物,可能参与了鼻咽癌的发生、发展。
【图文】：

生学位论文 SDF2L1 在鼻咽癌中的表达及其对鼻咽癌细胞生物学功能的影响本实验用的 RNAi 慢病毒载体为 GV248（图 1-1），，由上海吉凯术有限公司提供。慢病毒载体系统由 pHelper1.0 载体、pHelperV 慢病毒载体三个质粒组成。GV 慢病毒载体中含有 HIV 的基本3’LTR 和一些辅助元件组成，可对其进行改造用于基因功能验根据 SDF2L1 基因 RNA 干扰需求对 GV 进行了改造。pHelp含了 HIV 病毒的 gag 基因、pol 基因及 rev 基因，主要编码病毒及病毒包装的特异性酶。pHelper2.0 载体主要含有来源单纯疱疹-G 基因，用于编码病毒包装的包膜蛋白。

DF2L1 基因在鼻咽癌组织和鼻咽粘膜慢性炎组织中的 mRN采用qRT-PCR 方法检测12例鼻咽癌组织和12例鼻咽粘膜慢DF2L1mRNA 的表达。运用前面所述的 2-ΔΔCt算法来计算 SDF2对表达量，结果显示：SDF2L1mRNA 在鼻咽癌组织和鼻咽粘中的相对表达量分别为 0.549 0.568，1.254 0.729。鼻咽癌2L1mRNA 的相对表达量明显低于鼻咽粘膜慢性炎组织，且，差别有统计学意义（表 2-1，图 1-2）。表 2-1 SDF2L1mRNA 的相对表达量n 2-ΔΔCt( x±s ) P value膜慢性炎组织 12 1.254 0.729 0.015组织 12 0.549 0.568
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.63

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