LncRNA-MEG3在视网膜母细胞瘤中的作用及其分子机制研究
发布时间：2020-05-20 22:52
【摘要】：一、LncRNA-MEG3在视网膜母细胞瘤中的表达目的:检测IncRNA-MEG3在视网膜母细胞瘤组织及细胞中的表达。方法:qRT-PCR检测21例视网膜母细胞瘤组织与瘤旁正常组织、视网膜母细胞瘤细胞(Weri-Rb1、Y79)与正常视网膜色素上皮细胞(hTERT RPE-1)中lncRNA-MEG3 的表达。结果:视网膜母细胞瘤组织中IncRNA-MEG3的表达显著低于瘤旁正常组织,Weri-Rb1、Y79细胞中IncRNA-MEG3的表达显著低于hTERT RPE-1细胞。结论:LncRNA-MEG3在视网膜母细胞瘤组织及细胞中均为低表达。二、LncRNA-MEG3对视网膜母细胞瘤细胞功能的影响目的:检测Weri-Rb1、Y79细胞中IncRNA-MEG3表达量对细胞功能的影响。方法:用 pcDNA-MEG3 或 si-MEG3 转染 Weri-Rb1 或 Y79 细胞后,CCK-8实验及流式细胞仪检测细胞增殖、凋亡能力。结果:转染pcDNA-MEG3的Weri-Rb1细胞增殖显著减弱,凋亡显著增加;转染si-MEG3的Y79细胞增殖显著增强,凋亡显著降低。结论:LncRNA-MEG3在视网膜母细胞瘤中发挥抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的作用。三、视网膜母细胞瘤细胞MEG3基因启动子DNA甲基化状态对lncRNA-MEG3表达及细胞功能的影响目的:检测视网膜母细胞瘤组织及细胞MEG3基因启动子DNA甲基化状态,探讨其与IncRNA-MEG3表达量及细胞功能之间的关系。方法:MS-PCR检测21例视网膜母细胞瘤组织、瘤旁正常组织、Weri-Rb1、Y79细胞MEG3基因启动子DNA甲基化状态及IncRNA-MEG3表达量。5-Aza-CdR处理细胞后,检测IncRNA-MEG3表达量、细胞增殖及凋亡能力。5-Aza-CdR和siRNA-MEG3共同干预后,检测细胞增殖、凋亡能力。结果:视网膜母细胞瘤组织中MEG3基因启动子DNA处于甲基化状态的比例显著高于瘤旁正常组织,甲基化组lncRNA-MEG3表达量显著低于部分甲基化组及非甲基化组;Weri-Rb1、Y79细胞MEG3基因启动子DNA处于甲基化状态;用5-Aza-CdR处理后,lncRNA-MEG3表达量显著增高,细胞增殖显著减弱,凋亡显著增加;经5-Aza-CdR和si-MEG3共同干预后,5-Aza-CdR抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的能力均被逆转。结论:LncRNA-MEG3在视网膜母细胞瘤中低表达与MEG3基因启动子DNA过甲基化有关。四、LncRNA-MEG3在视网膜母细胞瘤中对Wnt/β-catenin信号通路活性的调控目的:探讨在视网膜母细胞瘤中IncRNA-MEG3是否可通过调节Wnt/β-catenin信号通路活性而发挥作用。方法:用pcDNA-MEG3或si-MEG3转染Weri-Rb1、Y79细胞后,用TOP-Flash reporter 实验检测 Wnt/β-catenin 信号通路活性,Western blot 实验检测β-catenin蛋白表达量;Wnt/β-catenin信号通路激活剂或拮抗剂与pcDNA-MEG3 或 si-MEG3 共同转染 Weri-Rb1、Y79 细胞后,检测 β-catenin 蛋白表达量、细胞增殖及凋亡能力。结果:转染pcDNA-MEG3的Weri-Rb1细胞,荧光素酶活性、β-catenin蛋白表达量均显著降低;转染si-MEG3的Y79细胞,荧光素酶活性、β-catenin蛋白表达量均显著增强;激活Wnt/β-catenin信号通路活性后,pcDNA-MEG3对Weri-Rb1细胞的抑癌作用被逆转;抑制Wnt/β-catenin信号通路活性后,si-MEG3对Y79细胞的促癌作用被逆转。结论:LncRNA-MEG3在视网膜母细胞瘤中可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路活性而发挥作用。
【图文】：
胞瘤组织及其相应的瘤旁正常视网膜组织中ｌｎＣＲＮＡ－ＭＥＧ３的表达水平，以逡逑Ｐ－ａｃｔｉｎ作为内参对照。实验结果显示ｌｎｃＲＮＡ－ＭＥＧ３在视网膜母细胞瘤组织中逡逑的表达水平显著低于瘤旁正常视网膜组织（Ｐ＜0．0５，图１－１），表明在视网膜母逡逑细胞瘤组织中，，ｌｎｃＲＮＡ－ＭＥＧ３的表达水平较其相应瘤旁正常视网膜组织显著逡逑降低，ｌｎｃＲＮＡ－ＭＥＧ３处于低表达状态。逡逑ｃ邋１．５￣ｉ逡逑0逡逑0逡逑｜邋１．０－逦逡逑0逡逑Ｓ逦女逡逑ＬＵ逦Ｉ逡逑２邋０．５－逡逑＞逡逑0＞逦？蕾詹~枺欤眨闉靛义希危铮颍恚幔戾危裕酰恚铮蝈义贤迹保卞澹瘢遥裕校茫壹觳馐油つ赶赴鲎橹捌湎嘤Φ牧雠哉Ｊ油ぷ橹绣义希欤睿悖遥危粒停牛牵车谋泶锼健＝峁允臼油つ赶赴鲎橹校欤睿悖遥危粒停牛牵车谋泶锼藉义舷灾陀诹雠哉Ｊ油ぷ橹校煎澹埃埃怠ｅ义希疲椋纾澹保卞澹裕瑁邋澹澹穑颍澹螅螅椋铮铄澹铮驽澹欤睿悖遥危粒停牛牵冲澹椋铄澹颍澹簦椋睿铮猓欤幔螅簦铮恚徨澹簦椋螅螅酰澹澹箦澹幔睿溴澹簦瑁澹椋蝈义希悖铮颍颍澹螅穑铮睿洌椋睿珏澹幔洌辏幔悖澹睿翦澹睿铮睿簦酰恚铮蝈澹颍澹簦椋睿徨澹簦椋螅螅酰澹箦澹鳎澹颍邋澹洌澹簦澹悖簦澹溴澹猓澹瘢遥裕校茫遥澹裕瑁邋澹澹穑颍澹螅螅椋铮铄义希常峰义
本文编号：2673323
【图文】：
胞瘤组织及其相应的瘤旁正常视网膜组织中ｌｎＣＲＮＡ－ＭＥＧ３的表达水平，以逡逑Ｐ－ａｃｔｉｎ作为内参对照。实验结果显示ｌｎｃＲＮＡ－ＭＥＧ３在视网膜母细胞瘤组织中逡逑的表达水平显著低于瘤旁正常视网膜组织（Ｐ＜0．0５，图１－１），表明在视网膜母逡逑细胞瘤组织中，，ｌｎｃＲＮＡ－ＭＥＧ３的表达水平较其相应瘤旁正常视网膜组织显著逡逑降低，ｌｎｃＲＮＡ－ＭＥＧ３处于低表达状态。逡逑ｃ邋１．５￣ｉ逡逑0逡逑0逡逑｜邋１．０－逦逡逑0逡逑Ｓ逦女逡逑ＬＵ逦Ｉ逡逑２邋０．５－逡逑＞逡逑0＞逦？蕾詹~枺欤眨闉靛义希危铮颍恚幔戾危裕酰恚铮蝈义贤迹保卞澹瘢遥裕校茫壹觳馐油つ赶赴鲎橹捌湎嘤Φ牧雠哉Ｊ油ぷ橹绣义希欤睿悖遥危粒停牛牵车谋泶锼健＝峁允臼油つ赶赴鲎橹校欤睿悖遥危粒停牛牵车谋泶锼藉义舷灾陀诹雠哉Ｊ油ぷ橹校煎澹埃埃怠ｅ义希疲椋纾澹保卞澹裕瑁邋澹澹穑颍澹螅螅椋铮铄澹铮驽澹欤睿悖遥危粒停牛牵冲澹椋铄澹颍澹簦椋睿铮猓欤幔螅簦铮恚徨澹簦椋螅螅酰澹澹箦澹幔睿溴澹簦瑁澹椋蝈义希悖铮颍颍澹螅穑铮睿洌椋睿珏澹幔洌辏幔悖澹睿翦澹睿铮睿簦酰恚铮蝈澹颍澹簦椋睿徨澹簦椋螅螅酰澹箦澹鳎澹颍邋澹洌澹簦澹悖簦澹溴澹猓澹瘢遥裕校茫遥澹裕瑁邋澹澹穑颍澹螅螅椋铮铄义希常峰义
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