大鼠视网膜缺血再灌注损伤中硫化氢及其相关酶变化的研究

发布时间：2020-06-03 16:12

【摘要】：目的:探讨诱导缺血再灌注损伤(Retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)对大鼠视网膜硫化氢及相关酶的影响,深入研究青光眼缺血再灌注损伤的发病机制及为青光眼防治寻找新目标及新靶向。方法:健康SD雄性大鼠80只,10周龄,300-350g。随机将大鼠分为正常对照组(对照组)8只,视网膜缺血再灌注损伤组(RIRI组)72只。在造模后1h,6h,12h,24h,48h,72h六个时间点分为6组,处死大鼠后,取出完整眼球,冰上去除角膜及晶状体,剩余部分沿矢状面分为两部分:1/2病理学固定后检测;余1/2分离出视网膜,匀浆后通过酶联免疫吸附实验测定(Enzyme linked immunosorbent assay,Elisa)法检测组织硫化氢含量,用逆转录聚合酶链式反应(Quantitative realtime Polymerase Chain Reaction,q PCR)和蛋白免疫印迹法(Western Boltting,WB)检测胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase,CBS),胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE),半胱氨酸氨基转移酶(Cysteine aminotranferase,CAT)及3-巯基丙酮酸硫基转移酶(3-Mercaptopyruvate sulfurtransferase,3-MST)的m RNA和蛋白表达。结果:(1)病理检测结果:RIRI后造成GCL层的病理损伤以先水肿后萎缩为主,对照组大鼠视网膜GCL层厚度为12.26±0.73μm;R1组为15.64±0.73μm,R6组为15.37±0.55μm,R12组为19.06±0.33μm,R24组为24.13±0.61μm,R48组为6.90±0.38μm,R72组为3.84±0.45μm。各组GCL层厚度较对照组均有明显统计学差异(P=0.00)。(2)对照组硫化氢含量为102.91±1.01 pg/ml,RIRI后1h,6h,12h,24h,48h,72h各组分别是100.2±2.13pg/ml,72.5±1.35 pg/ml,99.04±2.05 pg/ml,79.52±1.01pg/ml,106.5±3.57 pg/ml,88.09±2.27 pg/ml。除1h(P=0.11)和48h(P=0.17)外,其余各组硫化氢含量较对照组下降(P=0.00)。(3)q PCR法测定大鼠视网膜CBS、CAT、CSE及3-MST的m RNA表达:CBS组1h,6h,12h,24h,48h,72h分别为:0.10±0.02,0.11±0.01,0.35±0.08,1.00±0.02,0.09±0.04,0.15±0.05,显著低于正常对照组(所有P=0.00)。CAT组分别为:0.23±0.02,0.50±0.08,0.27±0.06,0.15±0.01,0.14±0.03以及0.34±0.10,显著低于正常对照组(所有P=0.00)。CSE组6.44±1.94,2.24±0.49,3.32±0.67,1.75±0.55,0.99±0.06,1.87±0.45。除24h(P=0.08)和48h外(P=0.70),其余各组各组表达显著高于正常对照组(所有P0.05)。3-MST组分别为0.50±0.02,0.64±0.18,0.38±0.04,0.59±0.17,0.59±0.05,0.75±0.08,显著低于正常对照组(所有P0.05)。(4)WB法检测CBS,CSE,CAT及3-MST的蛋白表达:RIRI后1h,6h,12h,24h,48h,72h CBS蛋白表达量分别是:0.07±0.01,0.18±0.01,0.04±0.01,0.09±0.13,1.00±0.01,0.38±0.06,显著低于正常对照组(所有P=0.00)。CAT蛋白表达量分别是:0.34±0.04,0.15±0.02,0.38±0.03,0.51±0.06,0.09±0.00,0.42±0.06,显著低于正常对照组(所有P=0.00)。CSE蛋白表达量分别是:0.45±0.04,0.21±0.02,0.16±0.02,0.10±0.02,0.06±0.01,0.05±0.01,显著高于正常对照组(所有P0.05)。3-MST蛋白表达量分别是:0.70±0.01,0.69±0.08,0.08±0.01,0.13±0.01,0.22±0.02,0.32±0.06。除6h(P=0.17)外,其余各组蛋白表达显著低于正常对照组(所有P0.05)。结论:(1)RIRI后病理结果显示,GCL层先水肿,后变薄萎缩。在72小时内视网膜随时间延长炎性细胞浸润、各层细胞丢失逐渐加重。(2)各组H2S含量较对照组均有不同程度的下降,其中下降最明显的为6h组。(3)RIRI后大鼠视网膜上硫化氢含量以及CBS、CAT、3-MST含量均有不同程度下降,相反CSE表达增加。推测可能CBS、CAT、3-MST在RIRI后引起的硫化氢生成减少中起到主导作用。
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R774.1

【参考文献】