DMBT1保护小鼠变应性鼻炎作用的机制研究
发布时间：2020-06-19 09:55
【摘要】：目的:变应性鼻炎(AR)是耳鼻喉科常见病,是一种由变应原引起的以Th2型细胞免疫为主的变应性疾病,其发病率高且患病率呈上升趋势,目前尚无有效根治方法。脑恶性肿瘤缺失基因1(DMBT1)是一种主要来源于上皮细胞的分泌性糖蛋白,在整个免疫系统都有表达,目前已知它的表达异常与炎症和肿瘤有关,但在变应性鼻炎中的作用目前尚无文献报道。前期研究显示DMBT1在变应性鼻炎患者基因及蛋白水平表达有明显差异,推测该蛋白与变应性鼻炎疾病有关,需要进一步研究以阐明其机制。方法:首先利用ELISA法检测变应性鼻炎患者及正常人鼻腔灌洗液DMBT1蛋白表达,利用免疫组化法检测变应性鼻炎患者及正常人鼻下鼻甲黏膜DMBT1蛋白表达情况。进一步通过OVA(鸡卵清白蛋白)致敏Balb/c小鼠,构建变应性鼻炎小鼠疾病模型,利用Western blot法及免疫组化、免疫荧光的方法检测变应性鼻炎小鼠模型组与生理盐水对照组小鼠鼻黏膜DMBT1表达情况。此外,我们通过建立不同表达重组DMBT1蛋白干预的变应性鼻炎疾病小鼠,观察其行为学指标,并利用ELISA法检测小鼠肺泡灌洗液Th2型细胞因子表达、血清IgE表达,HE(Hematein Eosin,HE)染色法计数小鼠鼻黏膜嗜酸性粒细胞(EOS)浸润情况。结果:1、ELISA法检测DMBT1蛋白表达在变应性鼻炎患者鼻腔灌洗液中表达上调;免疫组化检测变应性鼻炎患者下鼻甲黏膜中DMBT1蛋白表达明显上调。2、BALB/c小鼠经OVA+氢氧化铝凝胶佐剂干预后,从行为学、组织学、免疫功能(外周血OVAsIgE测定)三方面均符合典型变应性鼻炎疾病改变(小鼠AR模型建立成功),Western blot、免疫组化、免疫荧光法检测其鼻黏膜DMBT1蛋白水平明显较生理盐水对照组表达升高,差异均具有统计学意义(n=5,P0.05)。3、对变应性鼻炎小鼠进行重组DMBT1蛋白滴鼻后,小鼠行为学指标(挠鼻、喷嚏次数)下降,肺泡灌洗液中Th2型细胞因子表达下降,鼻黏膜嗜酸性粒细胞浸润减少,组间差异均具有统计学意义(n=5,P0.05)结论:1、本研究首次发现了DMBT1在鼻部为分泌性;首次发现在变应性鼻炎患者鼻部DMBT1表达升高;2、利用OVA+氢氧化铝凝胶佐剂干预BALB/c小鼠可成功构建变应性鼻炎小鼠疾病模型;变应性鼻炎组小鼠鼻黏膜DMBT1蛋白表达明显升高,提示该疾病模型可以为研究DMBT1对变应性鼻炎疾病的作用提供良好的动物实验基础;3、本研究首次发现DMBT1对Th2细胞具有抑制作用。提示DMBT1可能作为一种保护鼻黏膜的蛋白,具有抑制Th2细胞免疫的作用,对变应性鼻炎的发病和/或疾病进展有抑制作用。DMBT1有望为变应性鼻炎的治疗提供新方法新思路。
【学位授予单位】：中国人民解放军海军军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R765.21
【图文】：
DMBT1 保护小鼠变应性鼻炎作用的机制研究实验数据使用SPSS 23.0软件进行统计学分析，采用均数±标准差（mean±SD）表示，两组独立样本比较采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。三、实验结果（一）、免疫组化检测 DMBT1 在 AR 组患者下鼻甲黏膜中表达升高鼻黏膜 DMBT1 免疫组织化学分析结果提示：DMBT1 主要表达在鼻黏膜上皮细胞及其表面表达（如图 1-1）；400 倍镜下两组阳性染色百分比比较结果如下：对照组为 9.894±1.562，AR 组为 19.97±6.503，如图1-2 。（n=5, P<0.01）
海军军医大学硕士学位论文- 14 -图1-2 人鼻黏膜DMBT1阳性染色百分比与对照组相比，AR组显示DMBT1阳性染色百分比明显升高 (n=5, P < 0.01).（二）、ELISA 检测 DMBT1 在 AR 患者鼻腔灌洗液中表达升高正常对照组中，鼻腔灌洗液 DMBT1 表达为 0.694ng/ml (0.694±0.089ng/ml)；AR组鼻腔灌洗液 DMBT1 表达为 1.547ng/ml (1.547±0.152ng/ml)。经两个独立样本 T 检验显示，AR 组和对照组表达均存在显著性差异(n=5, P <0.01)。结果见表 1，图 2。表 1 鼻腔灌洗液 DMBT1 表达(ng/ml)Group 表达 Mean( ±s) P 值*Control 0.651 0.801 0.682 0.576 0.758 0.694±0.089AR 1.585 1.676 1.305 1.502 1.665 1.547±0.152 0.008*独立样本 T 检验显示，实验组和对照组之间的表达存在显著性差异(n=5, P<0.01)图2 人鼻腔灌洗液中DMBT1 表达与对照组相比，AR组鼻腔灌洗液DMBT1表达明显上升（n=5, P < 0
本文编号：2720632
【学位授予单位】：中国人民解放军海军军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R765.21
【图文】：
DMBT1 保护小鼠变应性鼻炎作用的机制研究实验数据使用SPSS 23.0软件进行统计学分析，采用均数±标准差（mean±SD）表示，两组独立样本比较采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。三、实验结果（一）、免疫组化检测 DMBT1 在 AR 组患者下鼻甲黏膜中表达升高鼻黏膜 DMBT1 免疫组织化学分析结果提示：DMBT1 主要表达在鼻黏膜上皮细胞及其表面表达（如图 1-1）；400 倍镜下两组阳性染色百分比比较结果如下：对照组为 9.894±1.562，AR 组为 19.97±6.503，如图1-2 。（n=5, P<0.01）
海军军医大学硕士学位论文- 14 -图1-2 人鼻黏膜DMBT1阳性染色百分比与对照组相比，AR组显示DMBT1阳性染色百分比明显升高 (n=5, P < 0.01).（二）、ELISA 检测 DMBT1 在 AR 患者鼻腔灌洗液中表达升高正常对照组中，鼻腔灌洗液 DMBT1 表达为 0.694ng/ml (0.694±0.089ng/ml)；AR组鼻腔灌洗液 DMBT1 表达为 1.547ng/ml (1.547±0.152ng/ml)。经两个独立样本 T 检验显示，AR 组和对照组表达均存在显著性差异(n=5, P <0.01)。结果见表 1，图 2。表 1 鼻腔灌洗液 DMBT1 表达(ng/ml)Group 表达 Mean( ±s) P 值*Control 0.651 0.801 0.682 0.576 0.758 0.694±0.089AR 1.585 1.676 1.305 1.502 1.665 1.547±0.152 0.008*独立样本 T 检验显示，实验组和对照组之间的表达存在显著性差异(n=5, P<0.01)图2 人鼻腔灌洗液中DMBT1 表达与对照组相比，AR组鼻腔灌洗液DMBT1表达明显上升（n=5, P < 0
【参考文献】
相关期刊论文 前3条
1 李华斌;;变应性鼻炎的发病机制及诊治进展[J];中华耳鼻咽喉头颈外科杂志;2014年04期
2 刘争;李华斌;崔永华;;局部变应性鼻炎[J];中华耳鼻咽喉头颈外科杂志;2011年11期
3 赵秀杰;董震;杨占泉;赵德荣;;鼻超敏反应实验模型的建立[J];中华耳鼻咽喉头颈外科杂志;1993年01期
相关硕士学位论文 前1条
1 刘冰;伴变应性鼻炎的鼻息肉基因芯片检测及其基因表达谱的研究[D];第二军医大学;2007年
本文编号：2720632
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