BCRP与Bre1A基因对喉癌细胞Hep-2增殖的影响

发布时间：2020-07-19 17:17

【摘要】：目的乳腺癌耐药蛋白(Breast cancer resistance potion,BCRP)和泛素化E3链接酶Bre1A与恶性肿瘤的发生发展密切相关,但它们调控喉癌的发生发展的机制尚不十分明确。本研究通过检测BCRP与Bre1A对喉癌细胞(Hep-2)增殖与迁移的影响,来探讨两者在喉癌的发生发展中所起的功能及作用。为未来临床诊断、治疗提供有价值的理论依据。方法本实验采用PCR技术从乳腺文库中扩增出人乳腺癌耐药基因BCRP和泛素化E3连接酶Bre1A,并将其正确插入到Myc和2B-Flag载体中;将空载体与重组质粒分别转染293T细胞到后,应用Western blot检测表达情况,应用生长曲线实验和细胞划痕实验检测BCRP及Bre1A对喉癌细胞(Hep-2)增殖的影响。结果分别成功构建人BCRP大小约为1835bp和人Bre1A大小约为2927bp的重组质粒,将PCR产物成功插入Myc和2B-Flag标签通过测序证明Myc-BCRP、2B-Flag-Bre1A构建成功,并且应用Western blot检测Myc-BCRP、2B-Flag-Bre1A融合蛋白的表达,显示在293T细胞转染重组质粒Myc-BCRP和2B-Flag-Bre1A后,前者在相对分子量约73KD处可见明显特异性条带,后者在相对分子量约120KD处可见明显特异性条带,表明重组质粒Myc-BCRP和2B-Flag-Bre1A能在细胞中正确表达。应用生长曲线实验检测BCRP及Bre1A表达对喉癌细胞(Hep-2)增殖的影响,结果表明BCRP能够促进喉癌细胞的增殖,Bre1A能够抑制喉癌细胞的增殖。再应用细胞划痕实验检测BCRP和Bre1A对喉癌细胞迁移的影响,过表达BCRP能够促进喉癌细胞迁移,过表达Bre1A能够抑制喉癌细胞迁移。结论BCRP促进喉癌细胞的增殖与迁移,Bre1A抑制喉癌细胞的增殖与迁移。这一研究结果对于BCRP和Bre1A对喉癌产生发展有了进一步的探索,为后续研究喉癌的发生发展机制提供新的理论依据。
【学位授予单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.65
【图文】：

视野进行拍照并标记，拍摄完毕h 对阳性对照组和阴性对照组进行统计分析，生长曲线和 RT-PC有统计学意义。载体的构建隆腺文库作为模板，获得大小约 1）。

c-BCRP 重组质粒酶切琼脂糖凝er；1: Myc-BCRP 重组质粒酶切产迹检测融合蛋白的表达 Myc-BCRP 和 Myc 空载体质，行 SDS-PAGE 凝胶电泳。果显示，293T 细胞转染重组明显特异性条带，而转染 MycRP 能在 293T 细胞中正确表达

Myc-BCRP 重组质粒酶切琼脂糖凝胶arker；1: Myc-BCRP 重组质粒酶切产物t 印迹检测融合蛋白的表达粒 Myc-BCRP 和 Myc 空载体质粒白，行 SDS-PAGE 凝胶电泳。W结果显示，293T 细胞转染重组质见明显特异性条带，而转染 Myc 空BCRP 能在 293T 细胞中正确表达（

【参考文献】

相关期刊论文 前6条

1 曾荣华;;喉癌手术切缘组织中p53、p21、PCNA及COX-2蛋白的表达与肿瘤局部复发的关系[J];临床耳鼻咽喉头颈外科杂志;2016年05期

2 孙臻峰;沈斌;张佳;苏甜甜;董频;;耐药基因MDR1(P-gp)和ABCG2在Hep-2细胞耐药中的作用研究[J];临床耳鼻咽喉头颈外科杂志;2015年11期

3 沈斌;董频;英信江;高尚;李大伟;;ABCG2及NF-κB p65在下咽癌中的表达意义[J];山东大学耳鼻喉眼学报;2012年04期

4 沈斌;董频;;乳腺癌耐药蛋白结构、功能及其在人体肿瘤中作用的研究进展[J];山东大学耳鼻喉眼学报;2011年03期

5 黄志刚;;喉癌基础研究现状和展望[J];中国耳鼻咽喉头颈外科;2010年02期

6 吴跃煌;唐平章;;晚期喉癌近代治疗观念[J];中国医学科学院学报;2006年03期

相关硕士学位论文 前1条

1 袁源;Nrf2和Keap1在喉鳞状细胞癌中的表达及意义[D];河北医科大学;2014年

本文编号：2762717