IGF1R反义长链非编码RNA-IRAIN与喉癌发生发展的相关性研究

发布时间：2020-09-02 17:34

　　喉癌是耳鼻喉科常见的恶性肿瘤,分子机制仍未明确。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)能通过包括表观遗传机制在内的多种作用机制参与多种肿瘤的发生及发展。研究发现类胰岛素生长因子I受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF1R)及其配体在大多数恶性肿瘤中表达上调,且参与肿瘤细胞的生长、演变、转移侵袭等。IRAIN(IGF1 receptor antisense imprinted noncoding RNA)是位于IGF1R启动子区域的一条的反义lncRNA,于2011年首次发现。目的:本实验旨在探索IGF1R反义长链非编码RNA-IRAIN是否影响喉癌的发生与发展,从而为诊断、靶向治疗、基因治疗喉癌及其预后提供新的分子机制思路。方法:收集吉林大学第二医院耳鼻咽喉头颈外科2016年8月至2017年8月接受UPPP术(悬雍垂-腭-咽成形术)6例患者的正常咽部黏膜和2014年8月至2017年8月37名行手术治疗喉癌患者的癌及癌旁组织标本。1)通过对32例喉癌组织及6例正常咽部黏膜进行DNA提取、gDNA送生物公司完成直接测序,根据gDNA测序结果选取出IRAIN SNP位点(rs8034564)为杂合峰的喉癌标本及正常咽部黏膜标本。2)接着对DNA测序结果为杂合子的正常咽部黏膜、喉癌患者的癌和癌旁组织进行RNA提取、cDNA测序。3)根据基因测序结果,分析等位基因表达的特点,明确该基因的印记表达状态。4)实时荧光定量PCR研究IRAIN和IGF1R在喉癌及癌旁组织中的表达。5)统计学分析IRAIN和IGF1R在喉癌、癌旁组织中的表达关系及IRAIN与喉癌患者临床病理特征之间的关系。结果:对32例喉癌组织和6例正常咽部黏膜的gDNA测序,结果喉癌组织SNP位点为杂合子的有17例,正常咽部黏膜5例。随后17例喉癌患者癌、癌旁组织及5例正常咽部黏膜的cDNA测序结果显示,IRAIN在喉癌组织、癌旁组织和正常咽部黏膜中均呈双等位基因表达。IGF1R在喉癌组织中较癌旁组织普遍呈高表达(P0.05)。IRAIN在喉癌组织的表达低于癌旁组织(P0.05);喉癌患者的年龄、临床分型、TNM分期、病理分化程度、是否淋巴结转移等方面与IRAIN的表达无密切相关(P0.05)。结论:(1)IRAIN在喉癌、癌旁及正常咽部黏膜中均呈双等位基因表达,即IRAIN等位基因在正常咽部黏膜、喉癌组织及癌旁组织中呈非印记表达。(2)相较于癌旁组织IGF1R在喉癌组织中普遍呈高表达,提示IGF1R可能与喉癌的发生发展有关。(3)在喉癌组织里IRAIN表达低于癌旁组织,提示IRAIN可能作为抑癌因素参与喉癌的发生;喉癌患者的年龄、临床分型、TNM分期、病理分化程度、是否淋巴结转移等方面与IRAIN的表达无密切相关。(4)IGF1R反义长链非编码RNA-IRAIN印记表达可能存在组织特异性。
【学位单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R739.65
【部分图文】：

自参考,途径,组分,相关蛋白

图 1.1 IGF-IR 途径及其组分的三个调节水平（自参考文献[26]）。A:内分泌水平上的系统调节。GH-IGF-IGFBP 轴由产生 GH 的垂体引导。GH刺激肝脏分泌其主要效应分子 IGF1、IGF2 和 IGFBPs。B：在组织水平上，游离配体（IGF1 和 IGF2）的水平受 6 种不同 IGFBP 和 IGFBP 相关蛋白的调节；其中IGFBP 对生长因子具有高亲和力，IGFBP 相关蛋白对 IGF1 和 IGF2 具有较低的亲和力。前体由特定的蛋白酶调节。Insulin、IGF1、IGF2 与不同亲和力的受体（胰

电泳图,电泳图,产物,基因测序

图 2.1 不同喉癌组织 gDNA PCR 产物电泳图.5.1.6 gDNA PCR 产物基因测序及 IRAIN 基因 SNP 位点将上述电泳后凝胶上所呈现的条带于紫外灯下进行切取，送至司进行基因测序。测序结果中的 2 个 SNP 位点，有一个位点为杂

电泳图,咽部,黏膜,反应产物

不同喉癌、癌旁及正常咽部黏膜中IRAIN表达区域内含有SNP位点（rs8034564）片段的RT-PCR反应产物电泳图

【参考文献】