先天性青光眼患者CYP1B1及LTBP2基因突变筛查的研究

发布时间：2020-11-08 22:13

　　 目的通过对中国汉族一个先天性青光眼家系及9例散发的先天性青光眼病例CYP1B1及LTBP2基因突变筛查,研究并确定其致病性,为中国汉族人群先天性青光眼的分子遗传学发病机制提供实验依据。方法收集青岛大学附属医院2007年2017年的1个先天性青光眼家系、9例散发病例及50位正常人,采集受试者静脉血10ml,提取外周血全基因组DNA,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增目的片段(CYP1B1基因编码区及LTBP2基因的14个外显子及邻近内含子)。琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物,进行直接测序。应用Chromas和DNAman软件筛查突变并与正常人对照,确定突变致病性。结果在先天性青光眼患者ZTC中发现了CYP1B1基因两个错义突变:c.988GT,c.989CT,p.A330F和c.1169GA,p.R390H。其中p.A330F在中国汉族人群中是首次报道,正常对照组未检出。此外,发现该基因4种已报道的单核苷酸多态性(SNP):c.142CG,p.R48W;c.355GT,p.A119S;c.1347TC,p.D449D;c.1294CG,p.L432V。对LTBP2基因筛查发现家系患病父子及散发病例GYY内含子序列点突变:g.74991741 AT(rs862032),位于Intron15-16,与疾病表型分离;在其他患者中检查到另外3个内含子突变:g.75022538TC(rs57176747);g.75019157AG(rs11622992)和g.74967541 AC,其中g.74967541 AC无SNP编号,为首次报道,其位于编码区后第46位核苷酸,属于3'端UTR突变。在LTBP2基因编码区鉴定出5个单核苷酸多态性(SNP),其中2个错义突变:c.956CA,p.P319Q和c.4286GA,p.R1429Q,正常对照组亦检出;3个同义突变:c.1287GA,p.L429L、c.2406TC,p.T802T和c.2502TC,p.T834T。其中p.L429L只在PCG患者中检出,p.T802T和p.T834T在患者及正常对照组均存在。患者和对照组都存在的内含子突变为:g.74992861TG和g.74991959 AG。结论1.p.A330F突变在我国PCG患者中首次发现,其与p.R390H形成的复合杂合突变使CYP1B1的结构发生了显著变化,是导致严重青光眼表型的致病性突变。2.LTBP2基因点突变g.74991741 AT与该家系发病相关,其与g.74967541 AC、g.75022538 TC和g.75019157 AG都参与先天性青光眼发病。
【学位单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R775.4
【文章目录】：
摘要
abstract
引言
材料与方法
    1 研究对象
    2 患者临床资料
    3 实验材料
    4 主要仪器及设备
    5 实验方法
        5.1 标本采集
        5.2 配置溶液
        5.3 外周血DNA的提取
        5.4 PCR引物的设计与合成
        5.5 PCR反应步骤
            5.5.1 PCR扩增体系
            5.5.2 PCR循环条件
        5.6 琼脂糖凝胶电泳
        5.7 PCR产物测序
结果
    1 患者的临床特征
    2 分子遗传学研究结果
        2.1 CYP1B1基因筛查结果
        2.2 LTBP2基因筛查结果
讨论
结论
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间的研究成果
致谢

【参考文献】

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本文编号：2875427