麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药抗A型流感病毒效应影响的研究

发布时间：2017-10-27 14:15

  本文关键词：麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药抗A型流感病毒效应影响的研究

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【摘要】：目的:探讨麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药体内、外抗A型流感病毒的效应及机理,为中西医结合治疗流感的临床应用提供实验支持。方法:1.应用血清药理学方法制备麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药的含药血清对狗肾传代细胞(MDCK)的最大无毒浓度范围,同步设麻杏石甘汤含药血清对照组、奥司他韦含药血清对照组、空白血清对照组。2.以MTT法检测麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药的含药血清在直接灭活病毒给药方式、预防感染给药方式、治疗感染给药方式中,对A型流感病毒感染的MDCK细胞活性的影响,并以2-(4-methylumbellifery1)-α-D-N-acetylneuraminic acid(MUNANA)为底物,检测这三种给药方式下,A型流感病毒神经氨酸酶的活性。3.小鼠经鼻腔接种A型流感病毒,建立动物感染模型,经药物或生理盐水灌胃后,检测麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药对A型流感病毒小鼠的治疗作用。结果:1.浓度为25%~3.125%的大鼠空白血清对MDCK细胞无明显毒性,与大鼠空白血清组比较,浓度为6.25%~25%的麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药含药血清组(联合用药含药血清组)的MDCK细胞活性OD值无明显差异(P0.05)。2.麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药的含药血清体外抗A型流感病毒的作用:(1)直接灭活病毒给药方式下,麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药的含药血清体外抗A型流感病毒效应:1)对流感病毒感染MDCK细胞活性的影响:与正常对照组比较,病毒对照组细胞活性OD值显著降低(P0.01)。与病毒对照组比较,浓度为6.25%、12.5%、25%的麻杏石甘汤含药血清组、奥司他韦含药血清组、麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药含药血清组(联合用药含药血清组)MDCK细胞活性显著提高,OD值升高(P0.01)且药物组存在一定量效关系;与麻杏石甘汤含药血清组相比较,联合用药含药血清组OD值显著升高(P0.05)。2)对流感病毒神经氨酸酶活性的影响:与正常对照组相比,病毒对照组NA活性的荧光值显著升高(P0.01)。与病毒对照组相比,空白血清组及各含药血清组NA活性的荧光值显著降低(P0.01)。与麻杏石甘汤含药血清组相比,联合用药含药血清组NA活性的荧光值显著降低(P0.01)。(2)预防感染给药方式下,麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药的含药血清体外抗A型流感病毒效应:1)对流感病毒感染MDCK细胞活性的影响:与正常对照组比较,病毒对照组细胞活性OD值显著降低(P0.01)。与病毒对照组比较,浓度为6.25%、12.5%、25%的麻杏石甘汤含药血清组、奥司他韦含药血清组、联合用药含药血清组MDCK细胞活性显著提高,OD值升高(P0.01),且药物组存在一定量效关系;与麻杏石甘汤含药血清组比较,联合用药含药血清组OD值显著升高(P0.05)。2)对流感病毒神经氨酸酶活性的影响:与正常对照组相比,病毒对照组NA活性的荧光值显著升高(P0.01)。与病毒对照组相比,空白血清组及各含药血清组NA活性的荧光值显著降低(P0.01)。与麻杏石甘汤含药血清组相比,联合用药含药血清组NA活性的荧光值显著降低(P0.01)。(3)治疗感染给药方式下,麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药的含药血清体外抗A型流感病毒效应:1)对流感病毒感染MDCK细胞活性的影响:与正常对照组比较,病毒对照组细胞活性OD值显著降低(P0.01)。与病毒对照组比较,浓度为6.25%、12.5%、25%的麻杏石甘汤含药血清组、奥司他韦含药血清组、联合用药含药血清组MDCK细胞活性显著提高,OD值升高(P0.01),且药物组存在一定量效关系;与麻杏石甘汤含药血清组比较,联合用药含药血清组OD值显著升高(P0.05)。2)对流感病毒神经氨酸酶活性的影响:与正常对照组相比,病毒对照组NA活性的荧光值显著升高(P0.01)。与病毒对照组相比,空白血清组及各含药血清组NA活性的荧光值显著降低(P0.01)。与麻杏石甘汤含药血清组相比,联合用药含药血清组NA活性的荧光值显著降低(P0.01)。3.麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药体内对A型流感病毒感染小鼠的治疗作用:(1)麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药对流感病毒感染小鼠体重的影响:与正常对照组相比,模型对照组体重显著降低(P0.01)。与模型对照组相比,麻杏石甘汤组、奥司他韦组、麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药组(联合用药组)小鼠体重明显增加(P0.01),体重下降抑制率分别为27.08%、29.32%、29.41%。与麻杏石甘汤组相比,联合用药组小鼠体重明显增加(P0.01)。(2)麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药对流感病毒感染小鼠肺指数的影响:与正常对照组相比,模型对照组肺指数明显增加(P0.01)。与模型对照组相比,麻杏石甘汤组、奥司他韦组、联合用药组小鼠肺指数明显降低(P0.01),肺指数抑制率分别为33.64%、40.21%、40.50%。与麻杏石甘汤组相比,联合用药组小鼠肺指数明显降低(P0.01)。(3)麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药对流感病毒感染小鼠脾指数和胸腺指数的影响:与正常对照组相比,模型对照组脾指数、胸腺指数显著降低(P0.01)。与模型对照组相比,麻杏石甘汤组、奥司他韦组、联合用药组小鼠脾指数、胸腺指数明显增加(P0.01)。与奥司他韦组相比,联合用药组小鼠脾指数、胸腺指数增加(P0.05)。(4)麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药对流感病毒感染小鼠肺组织病理变化的影响:正常对照组小鼠肺脏呈淡粉红色,质地柔软,肺叶表面光滑润泽,含气,无实变区。模型对照组小鼠肺脏出现不同程度的肺炎病理改变,肺叶有充血现象,呈现暗褐色外观。经药物干预后各组病变程度均有不同程度的减轻。改善程度依次是联合用药组、奥司他韦组、麻杏石甘汤组。结论:1.MDCK细胞能较好地感染A型流感病毒,可以作为病毒复制的理想载体。2.麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药的含药血清在直接灭活病毒给药方式、预防病毒感染给药方式及治疗病毒感染给药方式下对A型流感病毒感染的MDCK细胞的活性有保护作用,对流感病毒神经氨酸酶的活性有抑制作用,其效果优于麻杏石甘汤组。3.含药血清的抗病毒作用不仅与药物直接吸收入血的有效成分和浓度相关,还与大鼠机体存在的补体及酶等内源性活性物质的水平相关。所以本次实验通过大鼠空白血清对照以排除血清的非药物性干扰。4.麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药对A型流感病毒感染小鼠有保护作用,能抑制流感病毒感染所致的体重下降,降低肺指数,减轻肺组织病理损伤,效果优于麻杏石甘汤组,联合用药组能提高脾指数、胸腺指数,效果优于奥司他韦组。
【关键词】：麻杏石甘汤 奥司他韦 含药血清 A型流感病毒 MDCK细胞 神经氨酸酶 肺指数
【学位授予单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R96
【目录】：

• 中文摘要4-8
• ABSTRACT8-15
• 引言15-17
• 1.材料与方法17-25
• 1.1 实验材料17-19
• 1.1.1 主要仪器17
• 1.1.2 主要试剂17-18
• 1.1.3 实验动物18
• 1.1.4 实验药物18-19
• 1.2 实验方法19-24
• 1.2.1 制备含药血清19
• 1.2.2 大鼠含药血清对MDCK细胞毒性作用的检测19-20
• 1.2.3 病毒半数细胞培养感染量（TCID50）的检测20
• 1.2.4 麻杏石甘汤联合奥司他韦用药含药血清体外抗A型流感病毒效应的检测20-23
• 1.2.5 麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药体内对流感病毒感染小鼠的保护作用23-24
• 1.3 统计学方法24-25
• 2.结果与分析25-36
• 2.1 大鼠含药血清对MDCK细胞毒性作用检测25
• 2.2 病毒半数细胞培养感染量（TCID50）的测定25-26
• 2.3 麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药的含药血清体外抗流感病毒效应的影响26-33
• 2.3.1 直接灭活病毒给药方式下，麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药的含药血清体外抗A型流感病毒效应26-29
• 2.3.2 预防感染给药方式下，麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药的含药血清体外抗A型流感病毒效应29-31
• 2.3.3 治疗感染给药方式下，，麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药的含药血清体外抗A型流感病毒效应31-33
• 2.4 麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药体内对流感病毒感染小鼠的影响33-36
• 2.4.1 麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药对流感病毒感染小鼠体重的影响33-34
• 2.4.2 麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药对流感病毒感染小鼠肺指数的影响34
• 2.4.3 麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药对流感病毒感染小鼠脾指数和胸腺指数的影响34-35
• 2.4.4 麻杏石甘汤与奥司他韦联合用药对流感病毒感染小鼠肺组织病理变化程度的影响35-36
• 3.讨论36-40
• 4.结论40-41
• 致谢41-42
• 参考文献42-45
• 综述 防治流感的药物研究进展及思考45-58
• 参考文献51-58

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 顾觉奋;;新型抗流感病毒强效神经氨酸酶抑制剂帕拉米韦研究进展[J];中国新药杂志;2013年09期

2 王林林;史玉柱;王雪;刘燕;杨巧丽;姚华;黄华;;中药抗流感病毒研究进展[J];西北药学杂志;2012年06期

3 文丹丹;王敏;;麻杏石甘汤治疗咳嗽变异性哮喘的研究进展[J];中国实验方剂学杂志;2012年08期

4 苏文哲;柯昌文;;流行性感冒病毒的耐药性相关研究进展[J];中国病毒病杂志;2011年03期

5 张春晶;顾立刚;于海涛;;黄芩苷干预甲型H1N1流感病毒感染诱导的A549细胞周期分布及凋亡[J];病毒学报;2011年02期

6 徐红日;王成祥;王惠芳;姜良铎;刘清泉;张靖;;益气清瘟解毒合剂拆方对流感病毒FM_1感染小鼠血清炎性细胞因子的影响[J];中国中药杂志;2010年19期

7 卢芳国;何迎春;庞喻;伍参荣;张波;李玲;向琴;潘昆;;麻杏石甘汤对A型流感病毒感染的MDCK细胞活性与超微结构的影响[J];湖南中医药大学学报;2010年09期

8 李玲;卢芳国;熊兴耀;何迎春;朱应武;张薇;张波;;麻杏石甘汤对A型流感病毒感染小鼠的免疫保护作用[J];中医药学报;2010年02期

9 王晓静;王玉光;王融冰;郭利民;李兴旺;毛羽;;11例甲型H1N1流感确诊病例临床特征及治疗情况分析[J];中医杂志;2009年07期

10 张磊;;中医名家访谈——甲型H1N1流感的中医药防治[J];环球中医药;2009年04期

本文编号：1103841