褪黑素对氧化应激条件下ARPE-19细胞与人脐静脉内皮细胞共培养体系的作用研究及机制探讨

发布时间：2018-02-13 15:35

本文关键词： 脉络膜新生血管氧化应激褪黑素视网膜色素上皮细胞血管内皮细胞　出处：《复旦大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：通过建立ARPE-19与人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Epithelial Cell, HUVE C)共培养体系,应用褪黑素对氧化应激条件下的体系进行干预,研究HUVEC细胞的增殖和血管生成的变化,探讨作用的可能机制。方法：选用ARPE-19细胞系及HUVEC原代细胞培养,应用Transwell小室进行接触及非接触式共培养建立共培养体系。应用褪黑素、氧化剂对共培养体系进行干预。细胞增殖实验和血管生成实验对HUVE C细胞进行形态学观察。收集上清,用ELISA法对于血管生成相关的因子VEGF及PEDF进行检测。分别收集HUVEC及ARPE-19,应用Western Blot和细胞免疫化学方法检测细胞中VEGF、PEDF含量,应用qPCR检测细胞中VEGF、PEDF的mRNA表达。结果：第一部分：应用接触式与非接触式两种方法建立ARPE-19与HUVEC共培养模型,确定实验中的氧化剂浓度及作用时间。氧化剂刺激后,HUVEC增殖力和血管生成能力增强。两种共培养方式的细胞增殖和血管生成在氧化应激条件下无差异。第二部分：褪黑素处理组与氧化剂组相比,HUVEC细胞增殖力下降,血管生成减少。培养体系上清的ELISA结果显示,氧化剂组相对于对照组VEGF增多、PEDF减少,褪黑素处理组相对氧化剂组VEGF减少、PEDF增多。计算VEGF/PEDF比值,氧化剂组相对于对照组VEGF/PED F升高,褪黑素处理组VEGF/PEDF相对氧化剂组降低。比较两种共培养方式在不同干预条件下的各因子含量,接触式共培养的对照组、氧化剂组、褪黑素处理组VEGF及VEGF/PEDF比值均较非接触式共培养组高。PEDF两种培养方式相比较无统计学差异。共培养体系中,HUVEC细胞和ARPE-19细胞在氧化剂组的VEGF水平相对于对照组升高,褪黑素处理组相对于氧化剂组VEGF下降。氧化剂组PEDF含量相对于对照组下降,褪黑素处理组相对于氧化剂组PEDF升高。qPCR结果与Western Blot结果一致。第三部分：研究褪黑素对HVUEC的直接作用及作用机制。氧化剂组的细胞增殖较对照组增强,褪黑素干预组较氧化剂组降低。氧化剂组血管生成数较对照组增多,褪黑素处理组较氧化剂组血管生成数少。上清中,氧化剂组相对对照组VEGF增多、PEDF降低、VEGF/PEDF增高,褪黑素处理组相对于氧化剂组VEGF降低、PEDF升高、VEGF/PEDF降低。氧化剂组相对对照组VEGF合成及InRNA表达增多、PEDF合成及mRNA表达降低,褪黑素处理组相对于氧化剂组VEGF合成及InRNA表达降低、PEDF合成及mRNA表达升高。比较不同培养方式,在未有氧化剂刺激的情况下,H UVEC单独培养组与共培养组的 HUVEC增殖力和血管生成能力无差别。氧化剂刺激后,共培养组较单独培养组的HUVEC增殖力和血管生成能力增强。氧化剂组中,共培养VEGF/PEDF比值较单独培养更高,对照组和褪黑素处理组中共培养与单独培养的VEGF/PEDF无差异。研究褪黑素能否通过ARPE-19作用于HUVEC及其机制。将ARPE-19分成对照组、氧化剂组、褪黑素处理组,与HUVEC共培养。氧化剂组的HUVEC细胞增殖较对照组增强,褪黑素干预组较氧化剂组降低。氧化剂组血管生成数较对照组增多,褪黑素处理组较氧化剂组血管生成数少。上清中,氧化剂组相对对照组VEGF增多、PEDF降低、VEGF/PEDF增高,褪黑素处理组相对于氧化剂组VEGF降低、PEDF升高、VEGF/PEDF降低。ARPE-19细胞中,氧化剂组相对对照组VEGF合成及mRN A表达增多、PEDF合成及mRNA表达降低,褪黑素处理组相对于氧化剂组VEGF合成及mRNA表达降低、PEDF合成及mRNA表达升高。结论：氧化应激条件下,共培养体系中HUVEC增殖和血管生成增强。褪黑素使共培养体系中的VEGF下降,PEDF升高,VEGF/PEDF比值减小,调节了ARPE-19及HUVE C的VEGF及PEDF合成和表达,降低了HUVEC的增殖力和血管生成力。褪黑素可直接作用于HUVEC,调节VEGF、PEDF的基因表达和蛋白合成,降低氧化应激刺激后HUVEC的增殖和血管生成能力。褪黑素可通过调节ARPE-19的VEGF、PED F的基因表达和蛋白合成,影响HUVEC细胞的增殖和合成。
[Abstract]:Objective : To study the effects of melatonin on proliferation and angiogenesis of HUVEC by establishing a co - culture system of ARPE - 19 and human umbilical vein endothelial cells ( HUVE C ) . Compared with the control group , the growth of VEGF and the expression of VEGF / PEDF in the treated group were higher than those in the control group .

【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R96

【共引文献】