耐干扰素的HBV细胞模型的建立

发布时间：2018-06-16 21:29

  本文选题：干扰素 + 乙型肝炎病毒　； 参考：《安徽医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:建立耐干扰素(IFN)的乙型肝炎病毒(HBV)细胞模型,为进一步探索HBV对IFN产生耐药的机制提供实验基础。方法:1.应用HBV体外转染细胞株HepG2.2.15,采用干扰素α-2b(IFNα-2b)低浓度(10~70 IU/m L)长期诱导,历时48 wk建立HepG2.2.15/IFNα-2b细胞模型。2.比较不同浓度IFNα-2b处理后HepG2.2.15细胞上清液中HBs Ag、HBe Ag、HBV DNA的变化,从而选取最佳药效浓度。3.给予最佳药效浓度IFNα-2b培养细胞4 d,ELISA法比较低剂量IFNα-2b诱导前后细胞上清液中HBs Ag、HBe Ag的表达。q PCR法比较低剂量IFNα-2b诱导前后细胞上清液中HBV DNA的变化。4.通过MTT法比较IFNα-2b对HepG2.2.15和HepG2.2.15/IFNα-2b细胞的生长抑制情况。5.经最佳药效浓度IFNα-2b处理后,利用RT-PCR法比较HepG2.2.15和HepG2.2.15/IFNα-2b细胞中OAS、Mx A、ISGF3 m RNA的相对表达量。结果:1.HepG2.2.15细胞经IFNα-2b处理后,HBs Ag、HBe Ag和HBV DNA的表达均有不同程度的抑制,且呈浓度依赖关系。当浓度为1250 IU/m L,HBs Ag、HBe Ag、HBV DNA复制抑制率接近顶峰(抑制率分别为72.2%、49.3%、58.8%),当浓度加至1500 IU/m L时,抑制率增加较缓慢,可认为1250 IU/m L为最佳药效浓度。2.经低浓度IFNα-2b刺激12 wk后,50 IU/m L组对最佳药效浓度IFNα-2b的敏感性显著降低,与刺激前细胞比较,HBs Ag、HBe Ag、HBV DNA的抑制率分别降低了25.48%、8.40%、15.43%,认为50 IU/m L为最佳刺激浓度。3.经50 IU/m L IFNα-2b分别刺激12 wk~48 wk,发现36 wk后HBs Ag、HBe Ag、HBV DNA抑制率下降最明显,与刺激前细胞比较,抑制率分别降低了39.49%、15.71%、30.16%,认为36 wk为最佳刺激时间。4.IFNα-2b对HepG2.2.15和HepG2.2.15/IFNα-2b细胞均有生长抑制作用,抑制率随药物浓度呈浓度依赖关系(p0.05),并且相同浓度的IFNα-2b,HepG2.2.15与HepG2.2.15/IFNα-2b细胞抑制率相当(p0.05),IC50大约为262284.63和226471.20IU/m L。5.经1250 IU/m L的IFNα-2b处理后,HepG2.2.15/IFNα-2b细胞较HepG2.2.15细胞OAS、Mx A、ISGF3 m RNA的表达水平均有不同程度的降低。结论:经IFNα-2b持续诱导可使HepG2.2.15对IFNα-2b产生部分耐药,其中50 IU/m L IFNα-2b持续诱导36 wk最易使之产生耐药。
[Abstract]:Objective : To establish a model of hepatitis B virus ( HBV ) cells resistant to interferon ( IFN ) , and to provide an experimental basis for further exploring the mechanism of HBV infection to IFN 伪 - 2b . Methods : 1 . The expression of HBV DNA in HepG2.2 . 15 and HepG2.2 . 15 / IFN伪 - 2b cells was determined by MTT assay . The inhibition rates of HBsAg , HBe Ag and HBV DNA were reduced by 25.48 % , 8.40 % and 15.43 % , respectively , and the inhibition rates were decreased by 39.49 % , 15.71 % and 30.16 % respectively .
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R96

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本文编号：2028170