17β-雌二醇对去卵巢小鼠子宫组织D111基因表达的影响

发布时间：2018-11-23 11:39

【摘要】：目的：研究17β-雌二醇(E2)对去卵巢小鼠子宫组织Dll1基因表达水平的影响。方法：①将40只成年雌性小鼠分为4组(实验过程中死亡8只)，分别为Normal（正常对照）、Sham+NS（假手术+生理盐水）、OVX+NS（去卵巢造模+生理盐水）和OVX+E2（去卵巢造模+17β-雌二醇）；其中Normal组无任何干预；Sham+NS组仅切去卵巢附近少许性腺脂肪组织，给予相应体积生理盐水干预；OVX+NS组手术切去双侧卵巢组织，并给予相应体积生理盐水；OVX+E2组去双侧卵巢，每2天每千克体重给予1次E2，每次1mg，干预10d。②造模所切“卵巢”标本进行10%福尔马林固定，常规脱水，透明，浸蜡，包埋制成蜡块，，石蜡连续切片，进行HE染色。光学显微镜观察拍照，验证是否为小鼠卵巢；ELISA检测造模前后，及生理盐水和E2干预后血清雌激素浓度前后变化，验证造模是否成功和E2干预是否进入血液循环起到生物学作用。造模干预10d后，取全部小鼠的双侧子宫组织，称湿重，计算子宫系数，分析E2对小鼠子宫重量的影响。③采用TRIzol一步法提取总RNA，特异性引物对目标基因Dll1和内参基因Gapdh目标片段进行RT-PCR扩增，产物1.5%琼脂糖凝胶电泳，运用FR-200A全自动紫外与可见分析装置观察电泳结果并拍照，采用QuantityOne-4.6.2凝胶分析软件对Dll1基因与Gapdh基因的目标带进行半定量分析，测定Normal组、Sham+NS组、OVX+NS组和OVX+E2组Dll1基因与Gapdh基因目标带的光强度(Adj.Vol.)值；运用SPSS18.0统计分析软件得到4个组别的目的基因与内参基因目标带Adj.Vol.比值（x±s），进行单因素方差分析，然后进行组间均数的两两比较，以确定组间差异是否具有统计学意义。结果：①HE染色石蜡切片结果显示造模所切组织确为卵巢及输卵管组织；ELISA实验结果显示OVX+NS和OVX+E2组共17例小鼠血清雌激素水平造模后较造模前显著下降Z＝-3.479，P=0.001，P0.05，提示造模成功；OVX+E2组在E2干预10d后，血清雌激素水平较Normal、Sham+NS、OVX+NS组显著上升，且差异有统计学意义（P0.05）。OVX+E2组小鼠子宫系数显著大于其余3组，且差别具有统计学意义（P0.05）。②在生物电泳图像分析系统中观察到全部标本均出现目的基因Dll1与内参基因Gapdh的目标带，Normal组、Sham+NS组、OVX+NS组和OVX+E2组目的基因Dll1与内参基因Gapdh光强度比值分别为0.33±0.12、0.36±0.08、0.30±0.12和0.78±0.11。采用单因素方差分析，得出4个组别间的差异具有统计学意义（F＝35.580，P＝0.000，P0.05）；组间两两比较，结果显示OVX+E2组的Adj.Vol.的比值Dll1/Gapdh （x±s）显著大于其余3组（P＝0.000），且差异具有统计学意义（P0.05）。即可说明4组间Dll1基因表达水平差异具有统计学意义，OVX+E2组Dll1基因表达水平显著高于Normal组、Sham+NS组和OVX+NS组。结论：持续高水平E2干预可显著增加小鼠子宫系数，诱发子宫组织异常增生；同时诱导Dll1基因表达水平升高，导致Notch信号通路异常激活，可能是雌激素依赖性子宫组织异常增生甚至癌变的分子病理基础，其作用机制及意义有待于进一步研究。
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【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R965

【参考文献】