主被动双靶向纳米凝胶递送RRM2-siRNA的体外抗肿瘤效应

发布时间：2019-11-03 22:40

【摘要】：目的制备靶向输送针对核糖核苷酸还原酶RR小亚基M2(RRM2)的siRNA(RRM2-siRNA)的聚N-异丙基丙烯酰胺/聚乙烯亚胺(PNIPAM/PEI)纳米凝胶,通过研究其体外的抗肿瘤效应,以期构建新型靶向纳米凝胶递送基因系统。方法采用自由基接枝共聚合(radical graft copolymerization)反应制备具有"核-壳"结构的PNIPAM/PEI聚阳离子温度敏感型纳米凝胶,评价其粒径、zeta电位等理化性质;根据电荷相互作用原理,并通过偶联抗人表皮生长因子受体2(Her2)抗体,形成包裹RRM2-siRNA的靶向性PNIPAM/PEI-siRNA纳米凝胶复合体。利用凝胶电泳确定PNIPAM/PEI-siRNA纳米凝胶复合体包裹siRNA效果,通过荧光显微镜定性观察和流式细胞术定量检测人胃癌细胞NCI-N87对该纳米凝胶复合体的摄取情况,利用qPCR法检测该纳米凝胶递送siRNA后靶基因RRM2的表达情况,用Transwell法检测该纳米凝胶复合体对NCI-N87细胞迁移的影响。结果本研究合成具有"核-壳"结构的温度敏感型PNIPAM/PEI纳米凝胶,颗粒均匀,粒径为359.8nm,zeta电位为21.4mV。在此基础上,我们制备出靶向凝胶包裹RRM2-siRNA的纳米凝胶复合体,确定最佳包裹比例为N/P=60(N/P:聚阳离子纳米凝胶中氨基与质粒DNA中磷酸基的摩尔比)。不同温度下(37℃、42℃)细胞内吞实验证实,该纳米凝胶复合体具有良好的靶向性和温度响应性,且可以下调靶基因RRM2的表达,抑制NCI-N87细胞的迁移。结论成功制备抗体靶向的PNIPAM/PEI聚阳离子温度敏感型纳米凝胶,其可以结合并投递siRNA进入靶细胞,该纳米复合体可以作为新型抗肿瘤基因治疗的给药系统。
【图文】：

第二军医大学学报２０１７年６月，第３８卷图２纳米凝胶的粒径分布（Ａ）及电位大小（Ｂ）Ｆｉｇ２Ｐａｒｔｉｃｌｅｓｉｚｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ（Ａ）ａｎｄｚｅｔａｐｏｔｅｎｔｉａｌ（Ｂ）ｏｆｎａｎｏｇｅｌ图３不同Ｎ／Ｐ的包裹ｓｉＲＮＡ聚阳离子纳米凝胶的电泳结果（Ａ）和酶切保护与释放结果（Ｂ）Ｆｉｇ３Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ（Ａ）ａｎｄｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎａｎｄｒｅｌｅａｓｅ（Ｂ）ｒｅｓｕｌｔｓｏｆｓｉＲＮＡｓｐａｃｋｅｄｉｎｎａｎｏｇｅｌｓｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔＮ／ＰｒａｔｉｏｓＩｎＦｉｇ３Ａ，Ｍ：ＮａｋｅｄｓｉＲＮＡｃｏｎｔｒｏｌ；１：Ｎ／Ｐ＝５；２：Ｎ／Ｐ＝１５；３：Ｎ／Ｐ＝３０；４：Ｎ／Ｐ＝６０；５：Ｎ／Ｐ＝７５；６：Ｎ／Ｐ＝１２０．ＩｎＦｉｇ３Ｂ，Ｍ：ＮａｋｅｄｓｉＲＮＡｃｏｎｔｒｏｌ；１：Ｎ／Ｐ＝７５；２：Ｎ／Ｐ＝６０；３：Ｎ／Ｐ＝３０；ａ：ＳａｍｐｌｅｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＲＮａｓｅ；ｓ：Ｓａｍｐｌｅｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｈｅｐａｒｉｎ．Ｎ／Ｐ：Ｒａｔｉｏｏｆｎｉｔｒｏｇｅｎ－ｆｒｏｍ－ｐｏｌｙｃａｔｉｏｎｉｃｎａｎｏｇｅｌｔｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｆｒｏｍ－ＤＮＡｏｆｐｌａｓｍｉｄ２．３靶向纳米凝胶复合体的细胞内吞结果采用定性和定量的方法研究纳米粒子的体外细胞摄取，图４Ａ为荧光显微镜观察ＮＣＩ－Ｎ８７细胞对靶向纳米凝胶复合体的内吞结果，由图可见，ＦＡＢ－ｎａｎｏｇｅｌ组随着培养温度的增加细胞内吞的靶向纳米凝胶复合体的荧光增强，高于ＢＳ

第６期．张莉，，等．主被动双靶向纳米凝胶递送ＲＲＭ２－ｓｉＲＮＡ的体外抗肿瘤效应ｓｉＲＮＡ的靶向纳米凝胶复合体可以使ＲＲＭ２基因表达降低，且具有温度响应性（在４２℃时下调较３７℃更明显，Ｐ＜０．０５）。图５体外实验检测ＲＲＭ２沉默效率Ｆｉｇ５ＥｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆＲＲＭ２ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｂｙｎａｎｏｇｅｌ－ｓｉＲＮＡｃｏｍｐｌｅｘｉｎＮＣＩ－Ｎ８７ｃｅｌｌｓＲＲＭ２：ＲｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｒｅｄｕｃｔａｓｅｓｕｂｕｎｉｔＭ２．＊Ｐ＜０．０５ｖｓｎｅｇ－ｓｉＲＮＡｇｒｏｕｐ；△Ｐ＜０．０５ｖｓ３７℃．ｎ＝３，ｘs

本文编号：2555324