新型吲哚基查耳酮衍生物诱导肝癌细胞凋亡的相关机制研究

发布时间：2020-03-19 07:19

【摘要】：肝癌是世界上最常见的癌症之一,也是癌症死亡的第三大常见原因。肝癌在全球范围内患病率很高,其中东亚,非洲等发展中国家的肝癌发病率位居全球前列。肝脏是一种易受氧化损伤影响的器官。当ROS过多时,动态平衡将受到干扰,导致氧化应激。氧化应激在肝脏疾病的发生和发展过程中起着至关重要的作用。高水平的氧化应激导致氨基酸残基的氧化修饰,从而诱导DNA突变和细胞凋亡。细胞凋亡被广泛认为是大多数肝损伤的形式。细胞内线粒体代谢紊乱或活性氧(ROS)过度引起线粒体损伤,导致细胞色素C释放和caspase-3活化,从而激活caspase级联反应。目前肝癌的主要治疗手段包括物理疗法与化学治疗。在治疗过程中,患者会出现多种不良反应以及耐受性降低,因而迫切的需要治疗肝癌的新型的毒性较低治疗剂。化学治疗药物通过触发杀死癌细胞细胞凋亡在抗肿瘤中发挥着重要作用。因此,新的治疗靶点的发现与研究,为治疗肝癌提供一种新的合理的方法。小分子作为抗癌药物具有克服耐药性的特点,改善癌症患者的预后和生存,其可以作为癌症的新治疗方法。许多研究表明吲哚基衍生物及查耳酮衍生物都具有抗肿瘤和促癌细胞凋亡的作用。由此,我们猜测吲哚基查耳酮衍生物可能也是一种抗癌药物。本研究对吉林大学化学学院合成了一系列吲哚基查耳酮衍生物进行体外细胞毒性筛选。我们发现筛选出的化合物5h2c对肝癌细胞具有有效的细胞毒性。随后我们通过MTT细胞增殖实验进一步验证5h2c抑制HepG2和PLC/PRF/5两种肝癌细胞增殖。流式细胞术检测线粒体膜电位及DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧结果显示,5h2c能够改变线粒体膜电位和诱导ROS的生成。除此之外,通过流式细胞周期实验以及流式凋亡实验,证实了5h2c能引起肝癌细胞G0/G1期阻滞,并促进肝癌细胞凋亡。同时我们从Transwell实验和伤口愈合实验结果中发现,5h2c能够抑制HepG2和PLC/PRF/5细胞的迁移。接着我们选用凋亡阵列试剂盒用以寻找5h2c诱导肝癌细胞凋亡的分子靶点。检测结果显示5h2c能够引起多种蛋白质差异表达。Bcl-2家族蛋白和热休克蛋白是由5h2c诱导变化最为显著两种的蛋白质。我们对Western blot结果分析发现,5h2c能够增加Bax/Bcl-2比值,抑制热休克蛋白的表达,引发线粒体和死亡受体介导的凋亡。此外,我们还通过建立了肝癌细胞裸鼠异种移植瘤模型,证实5h2c抑制体内肝癌肿瘤进展。与此同时,5h2c处理后并未引起裸鼠体重显著变化也没有产生副作用。综上所述,5h2c可能是一种治疗肝癌的潜在抗癌候选药物。
【图文】：

HepG2细胞,生存能力,化合物,化学衍生物

第 3 章实验结果第 3 章实验结果2c 在 HepG2 和 PLC/ PRF/ 5 细胞中表现出细胞毒性HepG2细胞用以探究10个不同的合成的化学衍生物是否能影能力。我们采用 MTT 的方法，评价浓度为 50 μM 的不同化条件下对癌细胞生长抑制作用。实验独立重复三次。如图 3.物都具有抑制肿瘤细胞生长的作用。相对其他化合物，剂量为育 24 小时和 48 小时后，，表现出对 HepG2 细胞最强抑制

细胞生存,生存能力,HepG2细胞

图 3.2 5h2c 对 HepG2 细胞生存能力的影响Figure 3.2 The effect on cell viability of HepG2 cell after 5h2c treatment图 3.3 5h2c 对 PLC/ PRF/ 5 细胞生存能力的影响Figure 3.3 The effect on cell viability of PLC/ PRF/ 5 cell after 5h2c treatment
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R96

【参考文献】