环境敏感纳米脂质载体的构建与评价

发布时间：2020-03-22 23:41

【摘要】：近年来,由于纳米技术的迅速发展,环境敏感型纳米载体引发了人们的关注。在生物系统中,病理组织与正常组织之间的生理生化上的差异是药物释放的触发器,另一方面,外部刺激,例如光、磁场和超声可以在特定部位诱导载体破裂释放药物。与传统纳米载体相比,环境敏感型纳米载体具有精准递送、可控性较强等优点。由于“瓦伯格效应”肿瘤微环境呈弱酸性。利用这一特点,设计一种pH敏感脂质体,在肿瘤组织附近释放药物,实现制剂的主动靶向。本课题中,小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)、多西紫杉醇(docetaxel,DTX)作为抗肿瘤药物,pH敏感靶头修饰的脂质体作为药物载体,旨在实现siRNA、DTX的有效转染。研究最后合成了一种新型酸敏感功能肽,用于后续靶向载体的构建。第一部分环境敏感脂质体制备和表征目的:将低pH插入肽(pH low insertion peptides,pHLIPs)修饰脂质体,制备共载脂质体和载多西紫杉醇靶向脂质体。方法:共载脂质体(pH-Lip/DiD/si)的制备与表征:使用薄膜分散法制备脂质体,后插入法将pHLIPs修饰在脂质体表面,对制得的载药脂质体进行粒径、多分散系数(PDI)测定。载多西紫杉醇靶向脂质体(DTX-PL)的制备与表征:使用薄膜分散法制备脂质体,后插入法将pHLIPs修饰在脂质体表面,对制得的DTX-PL进行粒径、多分散系数测定。结果:pH-Lip/DiD/si粒径在160 nm左右,PDI小于等于0.3;DTX-PL粒径小于200 nm,PDI小于等于0.4。结论:pH-Lip/DiD/si和DTX-PL粒径、多分散系数基本符合要求,粒径分布较集中。第二部分二维肿瘤细胞模型水平评价目的:选择MCF-7细胞和Hela细胞为模型,考察pH-Lip/DiD/si胞内摄取与分布。方法:p H-Lip/DiD/si作用于MCF-7细胞和Hela细胞,其中siRNA具有绿色荧光,DiD具有红色荧光,Hoechst 33258对细胞核进行染色,借助激光共聚焦显微镜考察pH-Lip/DiD/si在细胞中摄取和分布情况。结果:胞内摄取与分布结果显示pH-Lip/DiD/si能够有效被细胞摄取,siRNA和DiD定位在胞浆中。结论:pH-Lip/DiD/si能够实现siRNA和DiD的有效摄取,并定位于胞浆。第三部分三维肿瘤细胞模型水平评价目的:选择MCF-7肿瘤球和Hela肿瘤球为模型,考察多西紫杉醇脂质体对肿瘤球的抑制效果。方法:使用悬滴法构建肿瘤细胞球,给药0~5天,每天测量肿瘤球长短径,计算肿瘤细胞球体积,综合考察比较不同脂质体对肿瘤球的抑制效果。结果:肿瘤细胞球毒性试验结果显示,多西紫杉醇脂质体能够抑制肿瘤生长,其中低pH插入肽修饰的脂质体组呈现出最强的肿瘤球生长抑制效应。结论:低pH插入肽修饰的纳米脂质载体具备显著的肿瘤微酸环境敏感特性,可实现多西紫杉醇的有效转染,抑制肿瘤球生长。第四部分酸敏感功能肽的研究目的:利用西佛碱反应,将NP肽与PP肽偶联,合成酸敏感肽NP-PP。方法:通过查阅文献及多次预试验,确定了几种NP-PP的合成方法。30oC水浴弱酸条件下,充氮气进行搅拌32 h,对合成产物质谱表征。结果:经质谱检测,合成的酸敏感功能肽实际分子量与理论值一致,NP-PP合成成功。结论:成功合成了酸敏感功能肽,方法简单,重现性好。
【图文】：

共载脂质体示意图

图 1-3 共载脂质体、载 DTX 靶向脂质体入胞示意图Fig. 1-3Aschematic illustration of the mechanism for the cytosolic deliveryof pH-Lip/DiD/si/DTX-PL.
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R943

【参考文献】

相关期刊论文 前4条

1 孙伟红;闫逍;杨少坤;向柏;杜青;曹德英;齐宪荣;;基于可激活细胞穿透肽修饰的纳米载体系统的研究概况[J];中国药学杂志;2015年23期

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本文编号：2595801