两种罗非鱼皮肽抑制UVB诱导HaCaT角质细胞光老化的机制研究

发布时间：2020-03-29 15:48

【摘要】：随着人口数量的不断增加,生态环境遭到破坏,导致环境中二氧化碳释放量不断的增加,最终全球变暖、臭氧空洞大量形成。因此,紫外线大量的透过空洞,辐射到地球表面。紫外线中的中波长紫外线UVB是主要造成皮肤损伤的紫外线,可以引起皮肤的光老化,造成皮肤损伤。所以保护皮肤免受UVB对皮肤的老化成为目前研究的热点。本研究以两种罗非鱼皮肽TGAGT和LSGTGP为材料,研究其抑制UVB(UltravioletB)诱导HaCaT角质细胞光老化的机制。以不同剂量的UVB辐射HaCaT细胞,通过噻唑蓝比色法(MTT)筛选出导致细胞半数致死量剂量为30 mJ/cm~2,建立了细胞损伤模型;通过MTT法证实两种罗非鱼皮肽TGAGT和LSGTGP在10-100μM的浓度范围内没有细胞毒性,并证实该浓度范围内有对UVB辐射后的细胞活力提高的作用。将两种罗非鱼皮肽分别作用于HaCaT细胞4h再经UVB辐射后培养24h,DNA氧化损伤实验结果表明两种罗非鱼皮肽对UVB辐射后的细胞氧化损伤的DNA具有保护作用;DCFH-DA法实验结果显示两种罗非鱼皮肽对UVB辐射细胞内活性氧(ROS)的产生起到抑制作用,蛋白免疫印迹法(WB)实验结果表明两种罗非鱼肽可以增加Glu和SOD含量的表达,维持细胞内抗氧化的水平;两种罗非鱼皮肽保护由UVB辐射后的HaCaT细胞,通过WB结果表明两种肽经过UVB辐射后,HaCaT细胞中MAPK信号通路中,p38、JNK和ERK蛋白表达量增加,当细胞经罗非鱼皮肽TGAGT保护后,磷酸化的p38和JNK蛋白表达量下降。然而,对ERK的磷酸化没有起到抑制性作用。随着罗非鱼皮肽LSGTGP的浓度升高,磷酸化的p38、JNK和ERK蛋白表答逐渐减少;WB实验进一步证明经两种肽保护后再UVB辐射后,磷酸化的p65和IκB蛋白的表达降低。通过细胞免疫荧光实验结果表明,两种罗非鱼皮肽TGAGT和LSGTGP保护的HaCaT细胞,随着肽浓度的增加,细胞中p65的入核情况逐渐减弱,这一结果直观的说明了两种罗非鱼皮肽能够抑制由UVB辐射HaCaT细胞p65的入核,抑制p65的表达;ELISA实验验证两种肽可以降低受UVB辐射后HaCaT细胞MMP-1和MMP-9的分泌,减少了MMP-1和MMP-9的过度表达,使其不能对胶原蛋白过度的降解,因此对胶原起到了保护作用。同时,两种罗非鱼鱼皮肽还可以提高I型胶原蛋白的含量,提高I型胶原蛋白自我的修复能力。因此,两种罗非鱼皮肽TGAGT和LSGTGP可以减缓因UVB辐射造成的皮肤损伤,对UVB造成的皮肤光老化起到保护的作用;因此,两种罗非鱼皮肽可以抑制通过ROS产生的氧化应激,及其介导的MAPK和NF-κB信号通路,进而控制细胞中的MMPs并提高细胞中胶原蛋白的含量,具有抑制UVB诱导HaCaT角质细胞的光老化作用。
【图文】：

图 1-1 实验技术路线Fig 1-1 Experimental technical route1.8 本课题研究的目的和意义鱼类废弃物是蛋白质，肽和氨基酸的重要来源，具有开发新型营养保健品的巨大潜力，可替代或将合成药物的潜在有害作用最小化。此外，使用这种技术可以达到双重目的，即从廉价和丰富的原料开发高附加值产品，并最大限度地减少鱼类废物的污染潜力。在过去几十年中，关于鱼类副产品回收及其潜在生物活性的知识大大增加。尽管如此，需要更多的研究来更好地理解鱼类副产物蛋白质水解物发挥其生物活性的机制。此外，必须进行进一步的体内研究以回答它们在机体中的吸收和生物利用度的问题，以开发用于人类功能性食品的营养保健品和针对多种疾病的天然药物的食品添加剂。本课题的研究，通过查阅大量关于罗非鱼鱼皮多肽的相关文献，选取两种罗非鱼鱼皮肽 TGAGT 和 LSGTGP[124-125]，并根据序列进行合成。并对其跟踪分析两种样品是否具备抑制光老化的作用，研究其活性机制。为预防 UVB 诱导皮肤光老化的海洋

图 2-1 UVB 辐射对 HaCaT 细胞相对活力的影响Fig 2-1 Effect of UVB radiation on the relative viability of HaCaT cells性实验种罗非鱼皮肽 TGAGT 和 LSGTGP 的毒性进行检测，分别的浓度为 10、20、50 和 100 μM 的两种肽培养生长状态良好的MT 法检测细胞活力，，结果如图 2-2。实验结果表明，两种罗SGTGP 浓度在 10、20、50 和 100 μM 时，与空白组相比，加样力不受影响，表示在该浓度范围内，两种样品不具有细胞毒性进行后续的实验，
【学位授予单位】：广东海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R96

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本文编号：2606186