东山湾海洋真菌的分离筛选及其活性菌株的天然产物研究

发布时间：2020-03-29 23:53

【摘要】：鉴于海洋环境相较于陆地环境的独特性,来源于海洋微生物的天然产物受到了研究者的重视。海洋真菌为了适应复杂特殊的海洋环境,形成了独特的生存和代谢机制,其天然产物结构多样且活性显著,是新药开发的重要来源。本文系统地研究了从福建漳州东山湾的海泥样品分离到的81株海洋真菌,完成了分子鉴定、小量发酵、抗菌活性和细胞毒活性筛选,选取活性最好的菌株WZW-F-30进行大量发酵,综合运用正相硅胶柱层析、RP-18反相硅胶柱层析、LH-20凝胶柱层析、薄层层析和高效液相色谱等分离技术以及核磁共振波谱和质谱等分析手段研究了海洋真菌WZW-F-30的天然产物。通过海水PDA培养基和海水孟加拉红培养基从20份海泥样品分离纯化的81株海洋真菌经过ITS分子鉴定得知它们分布在21个属,主要是青霉属、篮状菌属、曲霉属和茎点霉属等。对小量发酵粗提物进行的抗菌活性筛选和细胞毒活性筛选的结果显示活性最好的菌株是WZW-F-30,该菌株属于栀子茎点霉。从海洋真菌WZW-F-30的大量发酵粗提物中一共分离纯化了 17个化合物,其中有5个新化合物。活性追踪表明主要的活性产物是棒曲霉素和氯代龙胆霉醇,同时,新化合物WZW-04-036-01和WZW-04-103-01具有显著的抗细菌活性,能够抑制短小芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和耻垢分枝杆菌等细菌的生长,此外,新化合物WZW-04-103-01对Jeko-1、MDA-MB-231和A375等肿瘤细胞株具有一定的细胞毒活性。本文的结果表明,海洋真菌蕴藏着丰富的天然产物资源,是新药开发的重要来源。
【图文】：

采样地点

２．１．１样品来源逡逑本文的２０份海泥样品由厦门大学海洋与地球学院柯才焕教授课题组提供，逡逑于２０１５年８月采样于福建省漳州市东山湾附近海域（图２．１），样品ＤＳ０１Ａ１邋－逡逑ＤＳ０１Ａ５邋和样品邋ＤＳ０１Ｂ１－ＤＳ０１Ｂ５邋来源于邋Ｎ邋２３。４７’７２７”邋Ｅ邋１１７。２９’０７９”，样品逡逑ＤＳ０２Ａ１－ＤＳ０２Ａ５邋和样品邋ＤＳ０２Ｂ１－ＤＳ０２Ｂ５邋来源于邋Ｎ２３°４７’５３４”Ｅ邋１１７。２９’０１３”》逡逑经度邋１１７２９邋ｘ邋■逡逑样度２３４７逡逑图２．１采样地点逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２．１邋Ｓａｍｐｌｉｎｇ邋ｐｏｓｉｔｉｏｎ逡逑２．１．２常用培养基逡逑２．１．２．１真菌培养基逡逑海水ＰＤＡ培养基：称取２００邋ｇ去皮马铃薯，切成小块，加水煮沸３０邋ｍｉｎ，逡逑用八层纱布过滤其滤液，再在滤液中加入２０邋ｇ葡萄糖和３０邋ｇ海盐，加水定容至逡逑１Ｌ，邋１２１邋°Ｃ高压蒸汽灭菌２０邋ｍｉｎ。逡逑海水孟加拉红培养基：称取３５邋ｇ孟加拉红培养基干粉和３０邋ｇ海盐，加水加逡逑热煮沸溶解，定容至１Ｌ，邋１２１°Ｃ高压蒸汽灭菌２０ｍｉｎ。孟加拉红培养基购自北京逡逑奥博星生物技术有限责任公司，其成分为５邋ｇ蛋白胨、ｌｇ磷酸二氢钾、０．１邋ｇ氯逡逑１１逡逑

海洋真菌,海水

逑分菌结果显示，海水ＰＤＡ培养基和海水孟加拉红培养基能够有效分离海洋逡逑真菌（图３．１），不同形态特征的菌落在平板上可明显区分，以便于进一步纯化。逡逑＿煖＿⑩逡逑图３．１海洋真菌的分离平板逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３．１邋Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ邋ｐｌａｔｅｓ邋ｏｆ邋ｍａｒｉｎｅ邋ｆｕｎｇｉ逡逑２６逡逑
【学位授予单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R915

【参考文献】