沙利度胺抗LPS诱导的内皮细胞损伤效应及其初步机制

发布时间：2020-04-06 06:26

【摘要】：目的:探讨沙利度胺在氧化应激损伤过程中的作用以及初步探讨其可能的作用机制。方法:体外氧化应激损伤模型采用脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)构建,分别用0.25μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml LPS处理6h、12h、24h,流式细胞术测定LPS最佳造模时间及浓度。MTT法测定沙利度胺的无细胞毒性浓度。本研究分为6组,分别为:Control组、模型组、沙利度胺单独处理组、1μg/ml沙利度胺+1μg/ml LPS、10μg/ml沙利度胺+1μg/ml LPS、100μg/ml沙利度胺+1μg/mlLPS。沙利度胺分别预处理6h、12h、24h,LPS处理24h,TUNEL法与流式细胞仪测定沙利度胺最佳预处理时间及不同浓度沙利度胺的保护作用。Western Blot检测NF-κB下游P65以及P-P65的表达量。流式细胞仪检测ROS的产生量以及线粒体膜电位,Q-PCR检测Bax、Bcl_2和Hif-1α的表达量。结果:MTT结果显示沙利度胺浓度在0~125μg/ml范围内对HUVEC基本是无损伤的,故选取沙利度胺最大浓度作为后续实验的浓度。流式细胞术结果显示,较低浓度的LPS即可引起凋亡,与处理6h,12h相比,0.25μg/ml、0.5μg/ml LPS分别处理HUVEC 24h后的凋亡率明显增加(P0.05),且1μg/ml LPS处理HUVEC24h后凋亡率最高达到92%,相比处理6h和12h后的凋亡率,差异有统计学意义(P0.05)。2μg/ml LPS处理HUVEC在各个时间点与1μg/mlLPS处理后的凋亡率基本没有差别。100μg/ml沙利度胺预处理6h后凋亡率明显比模型组低,差异有统计学意义(P0.05),但是与预处理12h、24h相比,凋亡率基本没有改变,差异无统计学意义(P0.05)。此外100μg/ml沙利度胺预处理后凋亡率(31.5%)相比10μg/ml(52.6%)和1μg/ml(68.6%)的沙利度胺预处理,凋亡率显著下降,差异有统计学意义(P0.05)。通过Western Blot检测p-P65与P65的表达量,P65在15min是达到最大磷酸化水平,同时随着沙利度胺的浓度的增加,P65的表达量没有发生变化,p-P65的表达量逐渐降低,差异有统计学意义。(P0.05)同时随着沙利度胺预处理的浓度增加,ROS的产生量逐渐降低,线粒体膜电位有不同程度上升,与模型组相比,差异有统计学意义(P0.05)。同时通过检测Bax、Bcl_2和Hif-1α的表达量,我们发现,随着沙利度胺浓度的上升,Bax的表达量逐渐下降,Bcl_2的表达量逐渐上升。差异有统计学意义(P0.05)Hif-1α的表达量随着沙利度胺的浓度增加而减少。结论:LPS可以成功构建体外氧化应激损伤模型,同时沙利度胺预处理可以通过调节Hif-1α/ROS之间的产生量来保护线粒体免于氧化应激的损伤,为沙利度胺更好的应用于临床提供了研究基础。
【图文】：

最佳作用,沙利度胺,无细胞,毒性

图 1 LPS 最佳作用时间及浓度的确定Fig 1 Determination of optimal time and concentration of LPS4.2沙利度胺无细胞毒性浓度范围的确定通过MTT法测定沙利度胺的无细胞毒性范围，结果显示，当沙利度胺浓度为31μg/ml、62μg/ml、125μg/ml时对细胞基本是无毒性作用的（P>0.05），故最终确定沙利度胺无细胞毒性浓度范围为0~100μg/ml。见图2。

沙利度胺,活力,无细胞,毒性

通过MTT法测定沙利度胺的无细胞毒性范围，结果显示，当沙利度胺浓度为31μg/ml、62μg/ml、125μg/ml时对细胞基本是无毒性作用的（P>0.05），故最终确定沙利度胺无细胞毒性浓度范围为0~100μg/ml。见图2。
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R965

【参考文献】