海带低硫酸化杂多糖（UF）的指纹图谱及药代动力学初步研究

发布时间：2020-05-05 11:15

【摘要】：褐藻硫酸多糖组分因其具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎、抗凝血等多种生物活性,受到了广泛的关注。其中的褐藻多糖硫酸酯组分研究较多,但对硫酸杂多糖组分关注较少。本实验室在前期实验中通过对数十种海藻多糖神经保护作用筛选,得到一种对帕金森病(Parkinson’s Disease,PD)具有显著作用的海带低硫酸化杂多糖(Sulfated Hetero-Polysaccharides,UF)。UF是一种硫酸根含量较低、单糖组成复杂的杂多糖。由于其组成复杂,质量控制困难,药物代谢动力学进展缓慢,已成为制约UF药物开发过程中的瓶颈。采用高效液相色谱法初步建立了海带低硫酸化杂多糖的指纹图谱质量控制技术,对UF水解后的单糖组成色谱图进行分析,共鉴定出甘露糖、甘露糖醛酸、鼠李糖、岩藻糖等8个主要共有特征峰,且全谱相似度评价进一步证实了该方法应用于UF样品质量控制的可行性。针对低硫酸化杂多糖的结构特征,以异硫氰基荧光素(FITC)为标签,制备得到荧光标记多糖FITC-UF。通过紫外-可见光谱、红外光谱等分析方法,对制备得到的FITC-UF样品进行分析,表明FITC已经成功连接到了UF样品上,荧光强度较强且稳定。CCK-8法测定细胞活力实验表明荧光标记样品FITC-UF对PC12细胞无细胞毒性,可用于后续动物实验。方法学实验表明该方法可准确、快速、灵敏的对海带低硫酸化杂多糖样品进行微量、定量检测,为后续药物代谢动力学实验中大量生物样本的检测奠定了基础。经腹腔注射单次给药后,在小鼠的血液及各脏器中均检测到了海带低硫酸化杂多糖。药物代谢动力学数据分析可得,药物在体内吸收较快,达峰非常迅速;在体内吸收程度较好,但代谢较快。海带低硫酸化杂多糖在各器官中的分布比例较大,且能透过血脑屏障,在脑组织中有一定的蓄积。海带低硫酸化杂多糖质量控制方法的建立与初步的药物代谢动力学研究为解决制约UF成药过程中的瓶颈问题提供了一定的理论基础,可以在一定程度上加快UF作为创新型药物的研发进程。
【图文】：

指纹图谱,指纹图谱,浓度,面积

海带低硫酸化杂多糖（UF）的指纹图谱及药代动力学初步研究TFA 浓度达到 4 mol/L 时，峰面积达到最大值，随后峰面积开始下降，可能是因为 TFA 具有强氧化性，浓度过高时易导致样品发生氧化，从而导致样品被破坏，，水解后得到各单糖含量降低，各主要色谱峰的共有峰面积之和反而下降。因此水解样品使用 TFA 浓度过高或者过低都无法准确地对样品中的各单糖组分含量进行定量分析，可初步确定水解所用 TFA 浓度为 4 mol/L 时效果较好。

指纹图谱,衍生反应,指纹图谱,使用量

图 2.2 不同衍生反应时间对 UF指纹图谱共有峰面积之和的影响Fig. 2.2 Effect of different derivative time on the sum of common peak areas of HPLCfingerprint for UF(2) PMP 衍生化试剂使用量的筛选在衍生化反应的过程中，衍生化试剂 PMP 的使用量同样会对衍生化反应的程度产生一定影响。由图 2.3 可知，随着衍生化试剂使用量的增加，主要共有特征峰的峰面积之和呈现先升高后降低的趋势。当衍生化试剂的使用量高于 100μL时，随着 PMP 使用量的继续增加，各主要色谱峰的峰面积之和反而下降，说明在这种情况下，PMP 用量的增大影响了衍生化反应的充分进行，可能是由于过量的衍生化试剂导致反应过程中副产物的生成，各特征峰的共有峰面积之和下降。因此可初步确定当衍生化试剂 PMP 的使用量为 100μL 时，衍生化反应效果
【学位授予单位】：中国科学院大学(中国科学院海洋研究所)
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R914;R96

【参考文献】