阿霉素和四氢姜黄素双载多功能纳米制剂的构建及其作用研究

发布时间：2020-05-15 11:39

【摘要】：脑胶质瘤起源于神经胶质细胞,具有高侵袭性、预后差、致死率高等特点。常用的治疗脑胶质瘤的方法有手术切除、射线治疗和药物化疗。但是在肿瘤放化疗过程中,由于射线不敏感性,单一治疗模式的局限性,由血脑屏障造成的药物低渗透性、以及化疗药物的毒副作用等,导致治疗效果不理想。采用纳米载体系统,同时包载放疗增敏剂与化疗药物,制备一种能同时实现胶质瘤靶向治疗、靶向部位触发释药、同步放化疗的多功能纳米载体,作为一种新型治疗策略,是解决该问题的重要策略之一。本课题首次探讨了四氢姜黄素(Tetrahydrocurcumin,THC)对脑胶质瘤细胞的放疗增敏作用及其作用机制。采用MTT实验检测THC对C6和U251细胞增殖的影响;分别采用克隆实验、划痕法、流式细胞术检测THC结合射线对C6胶质瘤细胞射线敏感性、细胞迁移、细胞凋亡以及胞内周期分布的影响;微板酶标法检测给予不同处理后C6细胞还原型谷胱甘肽(GSH)的表达水平;免疫细胞化学染色和Western blot分别检测胶质瘤细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)和周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达含量。结果显示,四氢姜黄素通过增强射线对C6细胞原发性损伤,抑制胞内GSH的表达,诱导细胞发生G0/G1期阻滞来实现放疗增敏作用。在上述研究基础上,以聚乙二醇-聚乳酸-聚乙醇酸(Poly(ethyleneglycol)-poly(lactic-co-glycolic acid),PEG-PLGA)为基础载体材料,以碳酸氢钠(NaHCO3)为产气介质,以转铁蛋白为靶向修饰基团,采用W/O/W两步乳化蒸发法制备转铁蛋白(Transferrin,Tf)修饰的共载四氢姜黄素(Tetrahydrocurcumin,THC)和阿霉素(Doxorubicin,DOX)的多功能纳米递送系(Tf-NPs-DOX-THC);分别考察有机溶剂、投药量、共聚物用量等因素对纳米制剂载药量及包封率的影响,筛选优化处方;于透射电镜下观察纳米制剂的微观形态;采用DLS激光散射粒度分析仪检测纳米粒的粒径和Zeta电位;透析袋法测定药物释放;MTT比色法评价不同制剂组对C6细胞的增殖抑制作用以及材料的细胞安全性;荧光倒置相差显微镜下观察MCF-7细胞和C6细胞对游离DOX和转铁蛋白靶向纳米制剂的摄取情况;应用小动物活体成像仪定性观察载药纳米制剂在不同组织器官的分布;分别构建皮下胶质瘤模型和原位胶质瘤模型评估了纳米制剂联合X射线(Radiation,RAD)的体内抑瘤效果。结果显示,当投药量为1mg,共聚物用量为15mg,有机溶剂为二氯甲烷时,得最优处方。纳米制剂外观圆整,粒径分布均在250nm左右,载药量为6.71%,表面带负电荷;药物释放呈现pH依赖性;载体材料对肿瘤细胞无明显毒副作用,不同制剂组在C6细胞中均表现出剂量时间依赖的细胞毒性,且Tf-NPs-DOX-THC制剂组的细胞毒性显著高于其他制剂组;转铁蛋白修饰的靶向纳米制剂组(Tf-NPs)的细胞荧光强度明显高于非靶向纳米制剂组(NPs);Tf-NPs组通过转铁蛋白受体介导的主动靶向作用提高了药物在脑中的分布聚集,改善了体内分布;在皮下瘤和原位瘤模型中,Tf-NPs-DOX-THC+RAD治疗组呈现出最为显著的抑瘤效果,且无明显毒副作用;上述结果表明,转铁蛋白介导的pH响应的多功能纳米制剂在体内外脑胶质瘤模型中均呈现良好的治疗效果。
【图文】：

３．１课题设计及研究意义逡逑本课题首次探讨ＴＨＣ对胶质瘤细胞的放射增敏作用及机制，在此基础之上，逡逑构建多功能纳米载体用于改善胶质瘤的放化疗效果（图３），，实现放射增敏剂四逡逑氢姜黄素和化疗药物阿霉素的共递送，同时，通过以碳酸氢钠为ｐＨ敏感材料，逡逑以转铁蛋白为靶向基团，改善药物体内分布、提高药物靶向蓄积、控制药物释放，逡逑实现脑胶质瘤的同步放化疗。逡逑１４逡逑

逦＾逦山东大学硕士学位论文逦逡逑（１邋）按上述常规操作培养Ｃ６和Ｕ２５１细胞；逡逑（２）将Ｃ６脑胶质瘤细胞以每孔５０００个细胞的密度接种于９６孔板，过夜孵育逡逑使细胞贴壁；逡逑（３）给药刺激：向细胞中加入１００ｐＬ系列浓度（３、２７、５４、８１、１０７、１６１邋ｐＭ）逡逑的ＴＨＣ的ＤＭＳＯ溶液，将９６孔板继续置于培养箱中分别孵育１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ、逡逑７２ｈ；逡逑（４）药物孵育后，向％孔板每孔加入２０队浓度为５ｍｇ／ｍＬ的ＭＴＴ溶液，继逡逑续置于培养箱中孵育４ｈ；逡逑（５）取出培养板，吸去上清液，每孔精密加入１５０卩ＬＤＭＳＯ，摇床避光充分振逡逑荡，然后于５７０ｎｍ波长处测定各孔的吸光度（ＯＤ），计算细胞存活率。逡逑Ｃ６逦Ｕ２５１逡逑
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R943;R96

【参考文献】

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本文编号：2664971