MLIF对颅脑创伤的保护作用及其作用机制研究

发布时间：2020-05-15 21:21

【摘要】：目的:颅脑创伤(traumatic brain injury,TBI)是创伤中常见的病症之一,统计数据表明,TBI发病率位于各类创伤的首位,有着较高的病残率和病死率,严重影响着人们的身体健康与生活质量。而随着社会交通的发展,TBI发病率也在逐年攀升。研究证明,TBI诱发的水肿、炎症和氧化应激等复杂的反应会进一步导致细胞损伤。目前,在临床中缺乏有效治疗TBI的药物。所以,继续寻找开发出一种有效的药物,并阐明其作用机制十分迫切。单核细胞迁移抑制因子(monocyte locomotion inhibitory factor,MLIF)是一种由溶组织阿米巴分泌的五肽,具有抗炎、抗氧化等药理作用。本课题旨在研究MLIF对TBI的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法:1.MLIF对大鼠颅脑创伤的影响:(1)大鼠模型制备:采用液压打击法(打击压力:2.0 atm;打击时程:20 ms)制备大鼠颅脑创伤模型。(2)动物分组及给药:大鼠分为假手术组、模型组、MLIF低剂量组(0.3mg/kg)、MLIF中剂量组(1mg/kg)、MLIF高剂量组(3mg/kg)。大鼠颅脑打击后30min尾静脉注射给药,每24h给药一次,大鼠连续给药7天。(3)检测指标:损伤后,各组于24h、3d、7d各相应时间点取大鼠血清检测血清中SOD和MDA水平变化;取脑组织,利用干湿重法检测脑含水量变化;利用HE染色、尼氏染色观察脑组织病理改变;利用TUNEL染色检测脑组织损伤24h细胞凋亡情况。利用免疫组化、免疫荧光检测脑组织中AQP4表达情况;利用Real-time PCR检测脑组织中IL-1β、IL-6及TNF-αmRNA水平的表达;利用Western Blot检测脑组织中AQP4、Bax和Bcl-2蛋白表达变化。2.MLIF对小鼠颅脑创伤的影响:(1)动物模型制备:采用落重法制备小鼠颅脑创伤模型(重量:20g;高度:50cm)。(2)动物分组及给药:小鼠分为假手术组、模型组、MLIF低剂量组(0.6mg/kg)、MLIF中剂量组(2mg/kg)、MLIF高剂量组(6mg/kg)。小鼠颅脑打击后30min尾静脉给药,24h后取材。(3)检测指标:造模后24h取小鼠脑组织利用干湿重法检测脑含水量变化;利用HE染色、尼氏染色观察脑组织病理改变。结果:1.采用液压打击制备大鼠颅脑创伤模型,打击后30min大鼠分别给予MLIF:1mg/kg和3mg/kg,损伤24h后,MLIF组脑含水量均低于模型组,且MLIF(1mg/kg)组脑含水量明显低于MLIF(3mg/kg)组。当大鼠给予MLIF(1mg/kg),损伤24h和3d时间点,与模型组相比,MLIF组脑含水量明显降低(P0.05);HE染色和尼氏染色结果显示,模型组大鼠脑组织病理损伤明显,如水肿、细胞固缩等,而MLIF组大鼠脑组织病理损伤得到改善,如水肿程度降低、细胞结构较完整等。损伤24h后,TUNEL染色结果显示,较模型组,MLIF可以降低脑损伤导致的细胞凋亡。SOD和MDA结果显示,与模型组相比,损伤24h和3d时间点,MLIF能够提高脑创伤后大鼠SOD活性(P0.01),同时降低MDA的含量(P0.05)。2.采用落重打击制备小鼠颅脑创伤模型,打击后30min小鼠给予MLIF,损伤24h后,与模型组相比,MLIF组脑含水量均低于模型组,且MLIF(2mg/kg)组脑含水量下降最为明显(P0.05)。当小鼠给予MLIF(2mg/kg),损伤24h后,HE染色和尼氏染色结果显示,模型组小鼠脑组织出现水肿,病理损伤明显,MLIF组小鼠脑组织水肿减轻,病理损伤得到改善。3.采用液压打击制备大鼠颅脑创伤模型,当大鼠给予MLIF(1mg/kg),损伤在24h和3d时间点,与模型组相比,给予MLIF后能够明显抑制大鼠脑组织中促炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)的表达(P0.05)。AQP4免疫组化显示,MLIF能够减少AQP4蛋白的表达(P0.05)。4.采用液压打击制备大鼠颅脑创伤模型,大鼠给予MLIF(1mg/kg),在24h和3d时间点,Western blot检测大鼠脑组织中AQP4、Bax和Bcl-2表达,与模型组相比,MLIF可以降低脑创伤大鼠脑组织中AQP4、Bax表达和升高Bcl-2表达(P0.05)。结论:1.MLIF(1mg/kg)对大鼠颅脑创伤具有保护作用;MLIF(2mg/kg)对小鼠颅脑创伤具有保护作用。2.MLIF能够抑制促炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)的表达,调节AQP4、Bax和Bcl-2蛋白的表达水平。MLIF发挥颅脑创伤后的神经保护作用机制可能与抑制炎症因子表达,抑制AQP4蛋白过表达及调节Bax和Bcl-2蛋白的表达水平有关。
【学位授予单位】：安徽中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R965

【参考文献】