MicroRNA-149-3p在肠炎中的作用机理

发布时间：2020-05-16 00:05

【摘要】：大肠属于消化系统的下段,它在人体消化系统是一个重要的组成部分,对于维持人体内正常的内环境稳定有重要作用。在人体中,大肠的作用是能够进一步吸收粪便中的水分和电解质等。大肠的炎症或损伤会影响人体健康,目前经常出现的肠炎类型有结肠炎和直肠炎,这些疾病都对人体造成危害。MiR-149-3p是一种小分子RNA,它的主要作用是和目标靶mRNA中的3' UTR或5' UTR结合,从而调节蛋白质翻译以及mRNA的降解等作用。目前对于mRNA的研究越来越深入,更多的研究侧重于microRNA与细胞信号通路结合,本实验中主要研究的是NF-κB信号通路。NF-κB信号通路是一种经典的信号通路,已经有许多研究发现NF-κB信号通路与多种炎症和癌症有密切的关系。在我们的研究中也发现,miR-149-3p对肠炎的抑制作用与NF-κB信号通路密切相关。本实验中,我们主要通过动物实验和细胞实验两大部分对miR-149-3p在肠炎中的作用进行研究。在动物实验中,我们主要采用小鼠进行实验,用DSS诱导小鼠产生肠炎,构建出了小鼠肠炎模型,并取出其大肠组织,采用实时定量PCR的方法检测小鼠组织中炎症因子的表达情况,实验结果发现,实验组小鼠与对照组相比,炎症因子IL-2,IL-8,TNF-α,MCP-1的表达量均明显上升,进行HE染色后发现,miR-149-3p-/-小鼠比WT野生型小鼠对DSS诱导的大肠炎症损伤更加严重,更加敏感。此外我们测量了小鼠的表型特征,处理组中miR-149-3p-/-小鼠的大肠长度明显短于WT野生型小鼠,miR-149-3p-/-DSS组小鼠的体重下降比例明显高于野生型DSS组小鼠,也就是说miR-149-3p-/-小鼠对DSS诱导的肠炎更加敏感。在细胞实验中,我们采用人肠癌细胞caco2进行实验研究,实时定量PCR检测细胞中炎症因子的表达,转入miR-149-3p的处理组能够抑制COX-2、iNOS、MCP-1、IP-10、IL-1α和TNF-α的表达,加入TNF-α诱导后,这些基因的表达水平显著降低。Western Blot实验研究发现,miR-149-3p可以抑制IκBα蛋白的磷酸化。荧光素酶报告基因实验表明,转入miR-149-3p核酸模拟物后,能够抑制NF-κB报告质粒的活性。综上可以得出结论,miR-149-3p可以通过抑制NF-κB信号通路抑制肠炎。
【图文】：

小鼠,炎症因子,处理组,肠炎

图３－１实时定量ＰＣＲ逡逑Ｆｉｇ．３－１邋Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ邋ＰＣＲ逡逑注：图３－２中，ＷＴ为野生型小鼠，ＫＯ为ｍｉＲ－ＭＭｐＶ？小鼠。逡逑ＷＴ野生型小鼠实验对照组与ＤＳＳ实验处理组比较，ｍｉＲ－１４９－３ｐ－／－小鼠实验逡逑对照组与ＤＳＳ实验处理组比较，ＩＬ－２，邋ＩＬ－８，邋ＴＮＦ－ｃｔ，邋ＭＣＰ－１均明显上升，ＷＴ逡逑野生型小鼠的炎症因子表达上升量没有ｍｉＲ－ＭＷｐＶ？小鼠显著，说明ｍｉＲ－１４９－３ｐ逡逑可以抑制ＮＦ－ｋＢ下游基因的表达。ＷＴ野生型小鼠与ｍｉＲ－１４９－３ｐｖ？小鼠相比，逡逑ｍｉＲ－Ｍｇｊｐ－７？小鼠的ＩＬ－２，ＩＬ－８，邋ＴＮＦ－ａ，ＭＣＰ－１这四种炎症因子的表达量均上逡逑升，同样地，再比较ＷＴ野生型小鼠ＤＳＳ处理组与ｍｉＲ－ＭＷｐ—？小鼠ＤＳＳ处理逡逑组，ｍｉＲ－１４９－３ｐｖ＿小鼠ＤＳＳ处理组的基因表达水平显著升高，由此可说明ｍｉＲ－逡逑１４９－３ｐ对小鼠肠炎具有抑制作用

大肠,小鼠,小鼠模型,长度测量

图３－２小鼠体重称量逡逑Ｆｉｇ．３－２邋Ｗｅｉｇｈｔ邋ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ邋ｏｆ邋ｍｉｃｅ逡逑注：图３－２中，ＷＴ为野生型小鼠，ＫＯ为ｍｉＲ－ＭＷｐ－ｚ？小鼠。逡逑取出小鼠模型的大肠组织，并测量大肠的长度，我们发现ＤＳＳ实验处理组逡逑的大肠长度比实验对照组短，在实验处理组中，，ｎｉｉＲ－Ｍ＋ＳｐＶ？小鼠的大肠长度明逡逑显短于ＷＴ野生型小鼠。如图３－３。逡逑１．４邋－Ｉ逡逑ｌｌ．２邋－逡逑Ｉ：逦｜逦Ｉ逡逑ＩＩ逦Ｉ逦Ｉ逦Ｉ逡逑ＷＴ逦＋逦＋逦－逦－逡逑Ｋ０逦＋逦＋逡逑ＤＳＳ逦－逦＋逦－逦＋逡逑图３－３小鼠大肠长度测量逡逑Ｆｉｇ．３－３邋Ｍｏｕｓｅ邋ｃｏｌｏｎ邋ｌｅｎｇｔｈ邋ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ逡逑３３逡逑
【学位授予单位】：北京化工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R965

【参考文献】