QbD理念指导下的复合补液盐的制备、质控以及药效学研究

发布时间：2020-05-25 04:44

【摘要】：急性腹泻(Acute diarrhea,AD)是腹泻型疾病的一种,发病急促,周期较短,其主要病变部位在小肠,临床表现为腹痛、呕吐、排便频率增加等症状。特别是对于婴幼儿,容易引起脱水、微量元素短缺和生长发育缓慢等障碍。有研究表明,患者在发生AD时,及时补充Zn元素可以有效缩短腹泻持续时间和腹泻病程。本课题制备了一种新型复合补液盐,在补充电解质的同时增加Zn元素的吸收,且本文以质量源于设计(Quality by design,QbD)理念为指导对其制备工艺进行了优化,开发了能量色散X射线荧光光谱(Energy dispersive X-ray fluorescence spectroscopy,EDXRF)法对Zn含量进行质控,最后利用番泻叶诱导小鼠AD模型,通过HE染色、细胞因子变化、免疫组化、蛋白印记等实验考察复合补液盐的作用机制。主要研究内容如下:(1)以QbD理念为指导制备复合补液盐:评估筛选关键质量属性是混合均匀度和干燥失重,关键物料属性是原料的流动性以及粒度。确认处方:每包含有氯化钾0.375g、氯化钠0.650g、枸橼酸钠0.725g、无水葡萄糖3.375g、葡萄糖酸锌0.140g。经过风险评估筛选出关键工艺参数是初混、总混时间,最后选用Design expert软件进行两因素三水平的全因子实验,获得模拟方程RSD(28)1.75-0.033A(10)0.17B,预测优化RSD为0.217%时,混合均匀度最高,验证试验表明模型拟合较好,并建立控制空间为初混30min,总混40~45min。(2)EDXRF法对复合补液盐中Zn含量的质控:Zn元素标准曲线为y(28)0.7027x-80.24,其中R~2为0.9942,说明样品中Zn含量与X射线荧光强度线性关系良好;Zn元素的检测限是2.32?g/ml、定量限是7.04?g/ml;6份平行样品Zn元素检测结果的RSD是1.85%;准确度实验中三个水平的回收率均在98%-102%以内;对制备的两批样品和中间产品的检测结果符合要求,说明采用EDXRF法对复合补液盐中Zn含量进行检测是可行的,同时也可用于过程控制。(3)复合补液盐对AD的作用机制研究:采用番泻叶诱导小鼠AD模型,复合补液盐低、中、高剂量组都能够明显降低小鼠的稀便率、稀便级、腹泻指数和体重降低百分率;采用HE染色观察小肠组织发现,复合补液盐低、中、高剂量组还可以有效减轻小鼠小肠粘膜组织病理改变;采用酶联免疫法观察小鼠血清和小肠组织中的炎症因子改变,发现低、中、高剂量组的复合补液盐可以明显降低小鼠血清和小肠组织中的IL-8、TNF-α的水平,但对抑炎因子IL-4、IL-10无显著变化;接着通过免疫组化实验,发现复合补液盐高剂量组阳性率稍有上升;最后采用Western blot法对Claudin、Occludin、ZO-1、NF-κB蛋白表达水平进行检测,进一步证实复合补液盐对AD有着显著的治疗效果。
【图文】：

鱼刺图,鱼刺图,因素分析

图 2.1 处方因素分析鱼刺图Fig.2.1 Fishbone chart of formulation由图 2.1 以及预实验和相关文献资料得出，辅料的种类和用量对产品制备著性影响，所以在最终复合补液盐的制备中没有添加辅料；而原料的流动性度对处方开发以及工艺研究有着显著性的影响，即 CMAs 确认为原料的流动、粒度。.5 处方确认.5.1 原料性质考察.5.1.1 吸湿性分别对 5 种原料的吸湿特性（以吸湿平衡曲线表示）进行测定，确定其临对湿度（Critical Relative Humidity，CRH），，以便为生产、贮藏环境以及处计提供参考，具体操作步骤如下：称取氯化钾、氯化钠、枸橼酸钠、无水葡、葡萄糖酸锌适量，铺满于称量瓶底部，厚度约 2mm，称定其重量（m1）入盛有不同浓度的饱和盐溶液干燥器上部，于 25℃恒温恒湿箱中储存 24h，

曲线图,吸湿平衡,饱和溶液,原料

饱和盐溶液对应相对湿度数值见表 2.5，5 种原料吸湿平衡曲线见图 2.2。表 2.5 饱和盐溶液对应相对湿度表Tab.2.5 Saturated salt solution corresponding to relative humidity table饱和盐溶液类型相对湿度%醋酸钾饱和溶液 22氯化镁饱和溶液 33碳酸钾饱和溶液 43溴化钠饱和溶液 57氯化钴饱和溶液 65氯化钠饱和溶液 75氯化钾饱和溶液 85硫酸钾饱和溶液 97
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R943;R96

【参考文献】