辛伐他汀对大鼠髓核间充质干细胞增殖及分泌功能影响的研究

发布时间：2020-05-25 08:15

【摘要】：目的研究大鼠髓核间充质干细胞(nucleus pulposus-derived mesenchymal stem cell,NPMSC)的生物学特性及辛伐他汀对髓核间充质干细胞增殖及分泌功能的影响,探讨其作为内源性修复重建退变椎间盘的可行性。方法取8周龄SD大鼠尾椎髓核组织,采用胶原酶及胰酶序贯消化法分离NPMSC并进行体外扩增培养。观察细胞形态并通过MTT法检测细胞增殖,通过流式细胞仪检测细胞免疫表型及RT-PCR检测干细胞基因表达进行髓核间充质干细胞的鉴定。取第3代NPMSC施加不同浓度辛伐他汀干预(0mol/L、0.01μmol/L、0.1μmol/L及1μmol/L),在干预后1、3、7、14、21天通过CCK-8法检测细胞活力,RT-PCR检测蛋白多糖、Ⅱ型胶原、缺氧诱导因子 1 α(hypoxia-inducible factor-1 α,HIF-1 α)、葡萄糖转运蛋白 l(glucose transporter 1,GLUT-1)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的mRNA表达。结果原代细胞早期可形成葵花样细胞集落,传代后细胞生长较原代细胞明显加快,细胞形态以纺锤形为主。第3代细胞高表达干细胞相关阳性表面抗原分子CD73、CD90及CD105,低表达干细胞相关阴性表面抗原分子CD45及CD1 lb,与骨髓间充质干细胞具有相似的干细胞相关基因Sox2、Oct-4及Nanog表达水平。合适浓度(0.01 μmol/L-0.1 μmol/L)的辛伐他汀促进NPMSC增殖及HIF-1 α、GLUT-1、VEGF的mRNA表达,且0.1 μ mol/L浓度达到最强,而高浓度辛伐他汀(1μmol/L)对细胞增殖能力及HIF-1α、GLUT-1、VEGF的mRNA表达有明显抑制作用。辛伐他汀可使NPMSC中出现并促进Ⅱ型胶原及蛋白多糖mRNA的表达,0.1 μ mol/L浓度达到最强。结论合适浓度(0.01 μmol/L-0.1 μmol/L)的辛伐他汀可促进髓核间充质干细胞的增殖和细胞外基质的分泌,其机制可能与HIF-1 α介导的信号通路有关。
【图文】：

图１毮核间充质干细胞形态学观察（倒置相差显微镜Ｘ１００）。Ａ：原代细胞贴壁后早期可形细胞集落，，克隆样生长；Ｂ：原代细胞传代后细胞形态以纺锤形为主；Ｃ：第３代细胞形态基致为纺锤样长梭形逡逑ＮＰＭＳＣ细胞增殖曲线逡逑３０－１逡逑Ｉ逡逑ｏｎ逦／逡逑＾邋１０－邋／逡逑§邋／逡逑0逦｜逦｜逦ｒ逡逑０逦５逦１０逦１５逡逑培养天数（ｄ）逡逑

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【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R965

【参考文献】

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本文编号：2679846