睾丸酶和支持细胞功能蛋白在顺铂致大鼠睾丸细胞损伤中的作用

发布时间：2017-03-26 08:15

  本文关键词：睾丸酶和支持细胞功能蛋白在顺铂致大鼠睾丸细胞损伤中的作用，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的通过观察顺铂对大鼠睾丸组织病理学、精子密度和活率、睾丸酶、氧化应激和支持细胞功能相关蛋白表达水平等变化,探讨顺铂对睾丸细胞的毒作用及其可能机制。方法选择健康的成年雄性Wistar大鼠,随机分为4组,即生理盐水对照组、顺铂(CP)1.0、2.5和5.0 mg/kg组,进行腹腔注射染毒,每天1次,连续3天。于第4天处死大鼠,摘取大鼠附睾和睾丸组织进行检测。(1)常规制备睾丸组织病理切片,PAS染色后镜下观察病理学变化。(2)采用精子质量分析仪检测附睾中精子密度和活率。(3)制备睾丸组织匀浆,用生化法分别检测睾丸组织中乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)、酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)的活力,以及氧化应激指标总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的水平。(4)用实时荧光定量PCR法测定血红素加氧酶-1(HO-1)和金属硫蛋白-1(MT-1)的mRNA表达水平。(5)用western blot技术分析睾丸组织中支持细胞功能评价相关蛋白如转铁蛋白、波形蛋白、雄激素结合蛋白(ABP)和抑制素B的蛋白表达水平。结果(1)与对照组比较,顺铂2.5 mg/kg和5.0 mg/kg组大鼠体重显著降低,顺铂5.0 mg/kg组大鼠睾丸绝对湿重降低,顺铂2.5 mg/kg和5.0 mg/kg组大鼠睾丸脏器系数升高(P0.05)。PAS染色结果显示,顺铂各剂量组大鼠睾丸生精小管出现精原细胞数目减少,生精上皮层细胞排列紊乱,生精小管官腔内可见脱落的生精细胞,间质血管壁增厚等不同程度的病理学改变。(2)精子质量分析显示：与对照组比较,顺铂5.0 mg/kg组精子密度下降,c级精子数量减少而d级精子数量增多(P0.05)。(3)睾丸酶检测结果显示：与对照组比较,顺铂5.0 mg/kg组睾丸组织中LDH、ACP和AKP活力均明显升高(P0.05),顺铂各剂量组睾丸组织中SDH活力均显著降低而MDH活力仅在顺铂5.0 mg/kg组显著下降(P0.01)。(4)氧化应激效应指标检测发现,顺铂5.0 mg/kg组睾丸组织中SOD活力降低而MDA含量升高,顺铂各剂量组T-AOC水平均降低(P0.05)。顺铂各染毒组GSH-Px活力与对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。(5)与对照组相比,顺铂各剂量组睾丸细胞中MT-1mRNA表达水平均下调,而HO-1 mRNA表达仅在顺铂5.0 mg/kg组上调(P0.05)。(6)western blot结果显示,与对照组比较,顺铂2.5 mg/kg组和5.0mg/kg组睾丸组织中转铁蛋白和雄激素结合蛋白表达下降(P0.05),顺铂各剂量组波形蛋白和抑制素B表达水平均降低(P0.01)。结论顺铂导致大鼠睾丸组织损伤与其所致睾丸酶活力改变、氧化应激效应增强和支持细胞功能相关蛋白表达水平下调有关。
【关键词】：顺铂 睾丸酶 氧化应激 转铁蛋白 雄激素结合蛋白
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 一 前言9-16
• 1.1 顺铂的一般生物学特征9
• 1.2 顺铂的临床毒副作用9-12
• 1.3 顺铂对实验动物的一般毒作用及其机制12-14
• 1.4 顺铂对实验动物的生殖毒性及其机制14-15
• 1.5 研究目的和意义15-16
• 二 实验方法16-25
• 2.1 材料16-17
• 2.1.1 动物16
• 2.1.2 试剂16
• 2.1.3 仪器16-17
• 2.2 方法17-24
• 2.2.1 剂量选择及分组17
• 2.2.2 大鼠睾丸和附睾组织分离、摘取17-18
• 2.2.3 大鼠睾丸组织PAS染色18
• 2.2.4 大鼠精子活率和密度测定18
• 2.2.5 制备大鼠睾丸组织匀浆及生化指标测定18-22
• 2.2.6 大鼠睾丸组织HO-1和MT-1的mRNA水平测定22-23
• 2.2.7 大鼠睾丸组织中相关蛋白检测23-24
• 2.3 统计处理24-25
• 三 结果25-30
• 3.1 大鼠睾丸组织病理学变化25
• 3.2 大鼠体重和睾丸质量分析25-26
• 3.3 大鼠附睾精子活率和密度变化26-27
• 3.4 顺铂对大鼠睾丸酶的影响27-28
• 3.5 顺铂对大鼠睾丸组织氧化应激的影响28
• 3.6 顺铂对大鼠睾丸组织相关酶mRNA表达的影响28-29
• 3.7 顺铂对大鼠睾丸支持细胞功能蛋白的影响29-30
• 四 讨论30-36
• 五 结论及不足之处36-37
• 5.1 结论36
• 5.2 本研究的不足之处36-37
• 参考文献37-42
• 附录42-44
• 在学期间的研究成果44-45
• 致谢45

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 李英;顺铂诱发小白鼠精子畸形的研究[J];癌变.畸变.突变;1991年02期

  本文关键词：睾丸酶和支持细胞功能蛋白在顺铂致大鼠睾丸细胞损伤中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：268536