阿托伐他汀的抗白血病作用及机制研究

发布时间：2020-06-04 13:24

【摘要】：目的:本文选取人白血病细胞K562(CML)和HL60(AML)为实验模型,探讨了他汀类药物阿托伐他汀(Atorvastatin,AT)的抗白血病活性及分子作用机制,为拓展AT的抗白血病新用途提供理论依据和实验基础。方法:1.利用MTT实验检测AT对K562、HL60和健康人外周血单个核细胞(PBMCs)的增殖抑制作用。2.利用流式细胞术检测AT对K562和HL60细胞周期、凋亡、细胞内活性氧(ROS)以及线粒体膜电位的影响。3.利用细胞免疫荧光法分别检测不同浓度AT以及AT与甲羟戊酸(Mevalonic acid,MVA)共同作用对K562和HL60细胞内Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)表达及其核转位效应的影响。4.利用Western-blot检测不同浓度AT对K562和HL60细胞周期相关蛋白cyclin D1、p27、p Rb、cyclin B1、cdc2等因子表达或磷酸化水平的影响,凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-9、caspase-3、PARP、cytochrome c(cyt c)等因子表达水平的影响,细胞核内YAP以及细胞质中p-YAP水平的影响。5.利用Western-blot分别检测AT单独作用以及AT分别与MVA、香叶基香叶基焦磷酸盐(Geranylgeranyl pyrophosphate,GGPP)、法尼基焦磷酸盐(Farnesyl pyrophosphate,FPP)共同作用对K562和HL60细胞核内YAP表达水平、细胞质中p-YAP磷酸化水平的影响。结果:1.AT具有抑制人白血病细胞增殖活性。MTT结果显示,AT呈剂量依赖性方式抑制K562和HL60细胞增殖,药物IC50值分别为10.55μM和10.26μM;AT对人PBMCs的细胞毒性较低,IC50值为102.70μM。2.AT具有诱导K562和HL60细胞周期阻滞作用。碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)染色结合流式细胞术分析以及Western-blot检测结果显示,AT阻滞K562细胞周期G2/M期,引起细胞周期相关蛋白cyclin B1、cdc2降表达;AT阻滞HL60细胞周期G0/G1期,引起细胞周期相关蛋白p27升表达,cyclin D1、p-p Rb降表达。3.AT具有诱导K562和HL60细胞凋亡作用,该活性与ROS介导的线粒体凋亡途径密切相关。流式细胞术以及Western-blot分析结果显示,20μM AT处理K562和HL60细胞组的凋亡细胞数目(34.67%和39.16%)较对照组(6.20%和8.17%)显著增加;AT引起促凋亡蛋白Bax升表达,抗凋亡蛋白Bcl-2降表达,cyt c释放到胞浆,进而促进caspase-9、caspase-3、PARP裂解。此外,AT诱导K562和HL60细胞内ROS水平增加,线粒体膜电位水平降低。4.AT具有抑制K562和HL60细胞内YAP核转位的作用。细胞免疫荧光以及Western-blot检测结果显示,不同浓度AT处理后,K562和HL60细胞中YAP的核转位效应显著降低,表现为给药后细胞核内YAP降低,而细胞质中p-YAP升高。5.AT对YAP核转位效应的抑制作用依赖于MVA途径。细胞免疫荧光以及Western-blot检测结果显示,外源性MVA、GGPP的加入缓解了AT引起的YAP核转位抑制效应;此外,FPP的加入却无此影响。结论:1.AT体外抗白血病作用主要体现于对K562和HL60细胞的增殖抑制、周期阻滞以及诱导凋亡活性。2.AT对YAP核转位的抑制作用依赖于MVA/YAP途径,通过抑制MVA途径中间代谢产物的合成进而抑制YAP由细胞核向细胞质的转位效应。
【图文】：

观察拍照。学分析方法据用平均值±标准差（SD）表示，各实验至少重复 3 ad Prism 5.0 软件进行 t 检验，p < 0.05 具有统计学差异**p < 0.001）伐他汀（AT）对 K562、HL60 细胞增殖活性的影响同浓度的阿托伐他汀（AT）处理K562、HL60细胞以及正采用 MTT 法检测细胞数并计算细胞存活率。结果如图型中，阿托伐他汀（AT）以剂量依赖性方式抑制 K562 GraphPad Prism 5.0 计算其 IC50值分别为 10.55 μM、10伐他汀（AT）对正常细胞 PBMC 的增殖抑制作用较弱以上结果表明，阿托伐他汀（AT）能够抑制 K562、H时对正常细胞 PBMC 的毒性较低。

阿托伐他汀（AT）对细胞周期分布以及周期相关蛋白表达水平的影响
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R96

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本文编号：2696454