抗抑郁药氟西汀和帕罗西汀对斑马鱼脑组织5-HT能神经传导系统的影响

发布时间：2020-06-06 07:30

【摘要】：随着社会的快速发展,竞争的日益激烈,人民群众的生活压力也越来越大。抑郁症也变成了一种常见的精神类疾病,并且抑郁症患病率随着社会压力的增加正在逐年上升。世界卫生组织认为抑郁症的危害性仅次于心脏病。由于抑郁症患者的不断增加,抗抑郁药的使用量在不断提高。SSRI类抗抑郁药是目前临床使用最多的一类抗抑郁药,通过提高突触间隙5-HT浓度达到治疗抑郁症的目的。目前,药物引起的环境污染问题逐渐受到广大学者的关注。人类丢弃及代谢不完全排除体外的药物由于不能得到良好的清除,导致其广泛存在于地表水、海洋等水体环境中,严重危害水生生物的健康。本研究选取SSRI类抗抑郁代表性药物氟西汀和帕罗西汀,探讨其对斑马鱼脑组织5-HT能神经传导系统关键功能分子蛋白5-HT_(1A)受体和5-HT转运体(5-Hydroxytryptamine Transporter,SERT)转录及表达水平的影响,了解SSRI类抗抑郁药对斑马鱼脑组织5-HT神经传导系统的影响。成年斑马鱼分别连续暴露于氟西汀、帕罗西汀7d和14d,于染毒后检测5-HT_(1A)和SERT转录及蛋白表达水平。结果显示,氟西汀和帕罗西汀可引起5-HT_(1A)、SERT基因转录水平升高,伴有SERT蛋白表达水平降低。本研究结果提示,SSRI类抗抑郁药物氟西汀和帕罗西汀通过引起斑马鱼脑组织5-HT_(1A)受体和SERT水平异常,影响5-HT能神经突触结构,干扰斑马鱼脑组织5-HT能神经传导系统的正常生理功能,危害斑马鱼健康。本研究为进一步研究SSRI类抗抑郁药物对斑马鱼中枢神经系统的不良影响提供科学依据,为研究其他药物对水生生物的健康损害效应提供参考。
【图文】：

熔解曲线,胶块,电泳仪,缓冲液

配置 3%琼脂糖溶液。称取 3g 琼脂糖（Agarose）于锥形瓶中，加入 100mlTBE缓冲液混匀。并用报纸封口防止加热过程中外溅。放入微波炉中加热 5 分钟，彻底熔解清除气泡后取出。适当冷却后加入 50 μlNA-Red，混匀后倒入胶板中制胶。待彻底冷却后将胶块放入含有电泳液为 TBE 缓冲液的电泳仪中。取适量实时荧光定量产物，加入 DNA 上样缓冲液（6X），，混匀后上样 5 μl。DNA 分子量标准上样 5 μl。电泳仪电压设置为 120V，电泳时间 40 分钟。电泳完成后，取出胶块，将凝胶成像仪擦净，放入胶块摆正，通过凝胶成像仪进行观察。记录实验结果。2.3.实验结果2.3.1 实时荧光定量结果超微量分光光度仪测定四组样品 OD260/280 比值为 1.95~1.99。图 2-1（D 为5-HT1A，E 为 SERT，F 为 β-actin），图 2-2（E 为 5-HT1A，F 为 SERT，G 为β-actin）分别为染毒 7d 及 14d 氟西汀组，帕罗西汀组，混合组以及空白对照组四组的5-HT1A，SERT，β-actin 三个基因的 QPCR 扩增曲线和熔解曲线。

熔解曲线,帕罗西汀,转录水平,氟西汀

图 2-2 染毒 14dQPCR 的扩增曲线（左）和熔解曲线（右）Fig. 2-2 amplification curve (left) and melting curve (right) of QPCR at 14 days after exposure统计分析结果显示（表 2-4,*为差异有统计学意义）。染毒 7d 时，氟西汀组和帕罗西汀组 5-HT1A和 SERT 转录水平高于空白对照组，差异有统计学意义(P＜0. 05)；混合组 5-HT1A和 SERT 转录水平高于空白对照组，但差异无统计学意义(P＞0. 05)；氟西汀组 5-HT1A转录水平高于帕罗西汀组和混合组，差异有统计学意义(P＜0. 05)；氟西汀组 SERT 转录水平高于帕罗西汀组和混合组，但差异无统计学意义(P＞0. 05)；帕罗西汀组 5-HT1A和 SERT 转录水平低于混合组，但差异无统计学意义(P＞0. 05)。表 2-4 5-HT1A及 SERT 相对表达量（ x±s，n=3）Tab.2- 4 Relative expression levels of 5-HT1Aand SERT（ x±s，n=3）染毒天数 Days ofexposure分组 Grouping5-HT1A转录水平5-HT1ATranscriptionlevelSERT 转录水平SERT Transcriptionlevel氟西汀 87.45±5.87* 8.04±0.69*帕罗西汀 1.37±0.11* 2.74±0.06*7 d
【学位授予单位】：浙江海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R965

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