阿德福韦单L-硫代氨基酸酯，单胆酸酯衍生物的设计、合成与生物活性研究

发布时间：2020-06-14 05:19

【摘要】：目的针对阿德福韦酯存在剂量依赖性肾毒性、生物利用度低等缺点,依据前药设计理念,结合肠肝循环特性,采用生物电子等排、结构骈合原理,以阿德福韦为先导化合物,设计合成阿德福韦单L-硫代氨基酸酯,单胆酸酯衍生物,拟提高药物在肝细胞中的富集浓度和生物利用度。方法(1)目标化合物的合成:将带有N-Boc-保护的L-氨基酸于-25℃在N-甲基吗啉(NMM)和氯甲酸异丁酯(IBCF)存在条件下通入硫化氢气体,制备N-Boc-L-硫代氨基酸,再将其与1,2-二溴乙烷或1,3-二溴丙烷反应得到N-Boc-L-硫代氨基酸-2-溴乙酯或N-Boc-L-硫代氨基酸-3-溴-1-丙酯。以熊去氧胆酸/去氧胆酸为反应底物,通过与3-溴-1-丙醇在DCC/DMAP存在条件下发生缩合反应,制备熊去氧胆酸-3-溴-1-丙基酯/去氧胆酸-3-溴-1-丙基酯。将上述制备的产物,在N,N’-二环己基-4-吗啉基脒(DCMC)条件下,与阿德福韦通过“一锅合成法”缩合,产物经柱色谱分离纯化得阿德福韦N-Boc-单L-硫代氨基酸酯,单胆酸酯衍生物,经85%磷酸/氯仿体系进行脱Boc处理,得最终化合物阿德福韦单L-硫代氨基酸酯,单胆酸酯衍生物;(2)利用UPLC-MS/MS方法考察了目标化合物在人工胃液、人工肠液、大鼠空白血浆、肝微粒体中的稳定性及代谢规律;(3)采用稳定表达HBV-DNA的HepG 2.2.15细胞系,评价合成的目标化合物体外对HBV-DNA的抑制作用;(4)采用钠离子-牛磺胆酸共转运多肽(Na~+/taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)转染Hek 293细胞考察抗病毒活性较好的化合物在转染细胞中的摄取机制;结果(1)合成阿德福韦单L-硫代氨基酸酯,单胆酸酯衍生物共计16个,总产率为12.6-25.2%,所得目标化合物结构经~1H-NMR、~(13)C-NMR、ESI-MS和ESI-HRMS鉴定确证;(2)对受试化合物进行体外稳定性及代谢规律研究,结果显示,受试化合物在人工胃液中稳定性良好,在大鼠空白血浆、大鼠肝微粒体中的稳定性较阿德福韦酯好,半衰期长于阿德福韦酯,在人工肠液中稳定性较阿德福韦酯差,半衰期短于阿德福韦酯,其中化合物6d在肝微粒体中的裂解规律经初步分析,首先经过肝微粒体水解生成阿德福韦单去氧胆酸丙酯衍生物,再进一步水解成为原药阿德福韦;(3)体外抗HBV活性实验结果显示,8个受试化合物(6d,6e,6f,6g,6i,6l,6m,6n)均具有抗HBV活性,其中化合物6d,6i,6l,6m,6n的抗病毒活性及作用选择性指数(EC_(50) 3.95~29.41μmol·L~(-1),SI 89.50~454.07)与阳性对照阿德福韦酯(EC_(50) 3.09μmol·L~(-1),SI 142.04)相当,化合物6l的抗病毒活性最强、作用选择性指数最高(EC_(50) 3.95μmol·L~(-1),SI 454.07)。(4)通过NTCP转染Hek-293细胞考察了其摄取机制,结果表明所有受试化合物(ADV,6d,6l,6m,6n)在稳定转染HEK 293细胞与未稳定转染HEK 293细胞中的摄取量均随着浓度的增加而增加,在同一浓度下受试化合物(6d,6l,6m,6n)在稳定转染NTCP的HEK293细胞中的摄取量显著高于未转染的HEK 293细胞(P0.05);且摄取率为6l6m6n6d;而阳性对照阿德福韦酯在稳定转染HEK 293细胞与未稳定转染HEK 293细胞其摄取率随着浓度的增加未见明显正相线性关系增加;在稳定转染HEK 293细胞与未稳定转染HEK 293细胞中摄取率在统计学上未见明显差异(P≥0.05);结论首次合成16个未见文献报道的目标化合物,稳定性与代谢机制研究发现目标化合物在酸性条件下稳定性较好,在富含酶的中性、碱性等环境中稳定性较差,其在在肝微粒体酶的作用下先后断裂得阿德福韦,进而发挥抗病毒活性;抗病毒活性测试显示部分化合物具有较高抗HBV活性,其中化合物6l活性最好;摄取机制研究表明目标化合物能够借助于肝细胞膜特异性表达的NTCP实现其肝靶向性富集的特性。 【学位授予单位】：贵州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R914;R96

【图文】：

图 1-1 已上市或进入临床研究的非环核苷膦酸类前药Fig. 1-1 Acyclonucleoside phosphonates listed or in clinical trails些前药进行了不同的结构改造相对于阿德福韦酯虽然提高了 HBV 细胞毒性，但是仍存在一些不足，它们之中大都着力于改善阿德福度和脂溶性但是没有考虑药物对非靶向器官的影响，，没有从代谢的

与新合成的结合胆汁酸再次排入肠道，此circulation, EHC)[33]。正常人每天体内肠肝循环为 1汁酸能够被肝脏特异性重吸收，由此证明胆汁酸具性靶向性。钠离子依赖性胆酸转运体(human apical odium-depSBT)和钠离子-牛磺胆酸转运多肽(Na+/taurocholCP)是胆汁酸肠肝循环中最重要的两种转运体[34,35收进入门静脉血液和血液中的胆酸吸收进入肝细胞效基团偶联物能够被这两种蛋白识别为底物而提富集浓度[36]。 胆汁酸转运载体(hASBT/NTCP)对，胆酸衍生物可以被特异性识别与转运的关键主体 或 C-12 位上至少具有一个轴向羟基； 2）药效基是在胆酸的 C-3 位和 C-24 位上[37,38,39]。

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本文编号：2712342