三氧化二砷对慢性粒细胞白血病Hedgehog信号转导通路分子影响的基础研究

发布时间：2020-06-15 20:14

【摘要】：目的:以人类慢性粒细胞白血病(CML)细胞株K562为研究对象,探讨三氧化二砷(ATO)对K562细胞凋亡的影响,并探讨ATO对于Hedgehog(Hh)信号转导通路相关分子Gli1、Gli2、Smo和Ptch在mRNA和蛋白表达水平的影响,分析ATO影响Hh通路活性的可能机制,为将ATO应用于具有Hh通路异常激活的CML提供可靠的理论依据。方法:(1)使用不同浓度的ATO作用于K562细胞48小时,经Annexin V-FITC/PI染色后,采用流式细胞术检测ATO诱导K562细胞凋亡的效果。(2)采用免疫印迹(WB)技术检测ATO对Hh通路分子Gli1、Gli2、Ptch2蛋白水平表达的变化以及对CML致病关键分子P210/Bcr-Abl表达的影响。(3)采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测ATO对于Hh通路分子Gli1、Gli2、Smo和Ptch在mRNA水平表达的影响。结果:(1)经不同浓度ATO处理48小时后,各实验组K562细胞均出现了凋亡现象,且随着ATO的浓度的升高,凋亡效果越明显,呈剂量依赖性。(2)ATO对于Gli2和P210/Bcr-Abl蛋白表达具有显著的抑制作用,且抑制作用均呈剂量依赖性(P0.05);ATO对于Ptch2蛋白表达具有一定的促进做用,但高剂量呈抑制作用(P0.05);ATO对于Gli1蛋白表达无明显抑制作用。(3)ATO对于Gli1和Gli2 mRNA表达水平均具有显著的抑制作用,且抑制作用均呈剂量依赖性(P0.05);ATO可以上调Ptch的mRNA表达水平(P0.05);无论任何浓度的ATO均未对Smo的mRNA表达水平产生影响(P0.05)。结论:(1)ATO对K562细胞具有明显的诱导凋亡作用。(2)ATO可能是以Gli2蛋白为靶点抑制Hh通路活性,并通过降解P210/Bcr-Abl蛋白发挥作用。(3)ATO可能是通过抑制Gli1和Gli2的mRNA表达水平,上调Hh通路的抑制因子Ptch的mRNA表达水平,从而抑制Hh通路的异常激活。
【学位授予单位】：黑龙江中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R96
【图文】：

黑龙江中医药大学硕士学位论文逡逑理过后，各实验组Ｋ５６２细胞均出现了不同程度的凋亡效应，随着ＡＴＯ浓逡逑度的升高，凋亡效果越明显，呈药物剂量依赖性（图１）。同时结果显示，逡逑Ｋ５６２细胞对于ＡＴＯ的敏感性不高，当ＡＴＯ的浓度为１邋（＿ｉＭ、２ｐＭ时仅能诱逡逑导少量细胞凋亡，当ＡＴＯ浓度达到４＾ｉＭ、８ｐＭ时的诱导凋亡作用明显。逡逑逦逦邋逦逦逦逦逦、逦逦、」＇邋．ｉ邋逦逦逦逡逑％逦Ｖ；逡逑ｃｏｎｔｒｏｌ逦．邋０［ｊＭ逦ＩｍＭ逡逑Ｉ逦２邋丨邋＇逦■逦ｉ邋：逡逑０１邋ｍ逦＾逦＜ｉ１邋－ｏａ邋．逦＾逦？邋Ａ２逡逑｛P —、夏：逡逑—ｒ＂ｎ￣ｒｍＴ｜＂一邋ｔ？＊逦ＶＴＴＴＷ｜＊ｅ，＊Ｔｙ＊ｒＴＴｍｔｒ＇—＊ｆｒｍｒ｜￣Ｔ＇Ｔ＜ｒｙｒｒｐ￣￣￣ｒ￣ｒ￣Ｔ＊ｒｍｔｊ￣？ｒ＇＇逡逑５６＊逦ｗ＊逦ｒｒ逦ｘｆ＊逦＊ａＪ逦，８‘逦，９＊逦ｗ＊逦ｔｒ逦物４逦＜＃逡逑ＦＪＴＣＡ逦Ｆ１ＴＣ＜Ａ逦ＲｆＣ－Ａ逡逑逦邋＾０１３０３２＾－２逦逦邋逦Ｗ邋RG（Ｍ逦邋ｉ0ｌ邋１０３２０－８逡逑ｉY"—ｉＭ．——逡逑逦七邋ｒ—＞了—ｉ邋十逡逑ｆｍ－Ａ逦ｍ＾－Ａ逦ｍｃ－Ｍ逡逑图１不同浓度ＡＴＯ在４８小时内诱导Ｋ５６２细胞凋亡效应逡逑Ｑ１区：（ＦＩＴＣ－Ａ）－／ＰＩ邋＋，该区域细胞为坏死细胞。逡逑Ｑ２区：（ＦＩＴＣ－Ａ）＋／ＰＩ邋＋邋，该区域细胞为晚期凋亡细胞。逡逑Ｑ３区：（ＦＩＴＣ－Ａ）－／ＰＩ－

Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ邋检测邋Ｋ５６２邋细胞中邋Ｇｌｉｌ、Ｇｌｉ２、Ｐｔｃｈ邋以及邋Ｐ２１０／Ｂｃｒ－Ａｂｌ邋蛋白水逡逑平的表达情况。结果显示，ＡＴＯ对Ｈｈ通路的核心蛋白Ｇｌｉ２蛋白表达具有逡逑显著的抑制作用，且该抑制作用呈药物剂量依赖性（Ｐ＜0．０５）（图２）。逡逑ＡＴＯ对于Ｈｈ通路的抑制因子Ｐｔｃｈ２的表达具有一定的促进做用，但在高逡逑浓度ＡＴＯ作用下呈抑制作用，无剂量依赖性（Ｐ＞０．０５）（图３）。但对于逡逑Ｇｌｉｌ这个蛋白，实验结果显示，在４８小时的作用时间中，无论何种剂量的逡逑ＡＴＯ均未对其蛋白表达水平产生显著的抑制１邋乍用（Ｐ＞０．０５）（图３）。不逡逑同浓度ＡＴＯ均对致病蛋白Ｐ２１０／Ｂｃｒ－Ａｂｌ的表达具有抑制作用，且该抑制作逡逑用呈药物剂量依赖性，随着ＡＴＯ浓度的增加，Ｐ２１０／Ｂｃｒ－Ａｂｌ的蛋白表达水逡逑平下调（Ｐ＜０．０５）（图４）。逡逑ＧＩＰ逦１２邋３邋４逡逑ｇ逦．逦｜逡逑ｒａｔｉｏ邋（ＧＬＩ２Ｊ１３３－２４４ＫＤ逡逑■逦ｐ．５邋逦逡逑八邋一 一逦０４邋逦逦逦逡逑１逦：：逦Ｚ｜＝逦■—邋ｒ逡逑０：３ｈｒｌ：．逡逑１２３４逡逑Ｐ－ａａｉｉｒ．＇．逦逦逡逑，逦ｆ单Ｍ．邋ＩｆｉＭ邋２ｐＭ邋雄Ｍ邋ＡＴＯ逡逑４３—逦ｍｍｒｎ逦ｍｍ逡逑图２不同浓度ＡＴＯ作用于Ｋ５６２细胞４８小时后Ｇｌｉ２蛋白的表达情况逡逑３５逡逑

【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 裴卫z

本文编号：2714938