敞开式离子化质谱在药品检验中的应用

发布时间：2020-06-16 07:00

【摘要】：质谱(Mass spectrometry,MS)是化合物定性定量分析的常用仪器,具有专属性强、灵敏度高、分析速度快、无需标记等特点,但其密闭的离子化环境、复杂的前处理过程等因素使其应用受到限制。近年来常压敞开式离子化技术(Ambient ionization,AI)发展迅速,这种技术在敞开式环境中直接对样品中的待测分子离子化,操作简单、无需样品前处理,极大地推动了质谱在实时、表面、原位、高通量分析等方面中的应用。溶出度试验是评价口服固体制剂工艺一致、体内外相关性的一个重要参数。特别是对于生物等效性(Bioequivalence,BE)豁免的仿制制剂,体外溶出度的测定显得尤为重要,但对于一些紫外吸收低、剂量小的制剂而言,建立快速准确的溶出度测定方法十分困难。本论文中我们搭建了纸喷雾离子化(Paper spray ionization,PSI)装置,首次建立了PSI-MS溶出度检测方法,可有效的解决不挥发性盐与质谱不兼容的弊端,不受样品有无紫外吸收的影响且前处理简单,适合于低含量制剂的测定。我们以马来酸依那普利、盐酸喹那普利、盐酸贝那普利为待分析物,以相应的氘代试剂为内标,测定范围内线性关系良好;用新建的PSI-MS法测定了马来酸依那普利片的溶出度,测定结果与液相色谱法一致,说明PSI-MS可用于药物溶出度的测定,测定时间仅需几十秒。不是所有的待测药物都能找到相应的氘代试剂,加之氘代试剂价格昂贵,为开发其普适性,本论文进一步研究了使用非氘代内标测定药物溶出度的可行性。我们选择与待测样品化学结构、性质相似的非氘代化合物非那雄胺杂质Ⅰ替代氘代试剂为内标,成功的测定了非那雄胺片的溶出度,测定结果与HPLC结果一致,证明了非氘代内标的适用性,拓展了PSI-MS在溶出度测定方面的应用。Aβ蛋白是阿尔兹海默症(Alzheimer’s disease,AD)患者脑中老年斑的重要组成部分,被认为是治疗AD的潜在靶点,有研究表明人参皂苷可用于延缓AD,推测其作用机理可能是通过人参皂苷与Aβ蛋白非共价相互作用实现的,由于非共价相互作用较弱,目前尚无有效技术手段测定非共价键的结合,也无法阐明人参皂苷作用机理。冷喷雾离子化技术(Cold spray ionization,CSI)是在低温条件下实现离子化,离子化方式更软,有助于保存溶液中弱的非共价相互作用,有望为非共价药物-蛋白质复合物研究提供有力手段。本论文基于CSI-MS技术建立了检测非共价相互作用新方法,首次研究了人参皂苷与Aβ蛋白间非共价相互作用,通过直接及竞争性实验对人参皂苷与Aβ蛋白结合化学计量比、配体的结合基团以及各人参皂苷的相对结合力进行了测定,从分子水平上阐明了人参皂苷可通过与Aβ蛋白结合干扰Aβ蛋白的聚集,为非共价相互作用的研究以及阿尔兹海默症治疗药物的研制提供了很好的检测手段。
【学位授予单位】：中国食品药品检定研究院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R927.1;O657.63
【图文】：

S40K 型酸度计（瑞士），电子天平（METTLER-TOLEDO），超纯水仪（默克密理博公司，Millipore, Bedford, MA），色谱纸（Grade 1，Whatman），铝片，高压直流电源。1.2.2 纸喷雾质谱装置系统图 1-1 为纸喷雾离子源装置示意图及实物图，其结构主要包括用于喷雾的三角形色谱纸、用于支撑色谱纸且能够导电的三角形铝片以及用于产生电喷雾的高压直流电源。三角形色谱纸尖端角度为 30°，底：5 mm，高：10 mm，电压：4kv，纸喷雾尖端距质谱口的距离约 6 mm。实验操作主要分为四步，如图 1-2 所示：一、将 5 μl 待测样品溶液滴加到三角形纸片上；二、在空气中自然晾干 10 min；三、纸片后端施加 4 kv 的高压电，同时滴加 10 μl 的喷雾溶剂；四、样品分子溶于喷雾溶剂中并在电压的作用下在色谱纸尖端形成电喷雾，进入质谱检测。

三角形色谱纸尖端角度为 30°，底：5 mm，高：10 mm，电压：4kv，纸喷雾尖端距质谱口的距离约 6 mm。实验操作主要分为四步，如图 1-2 所示：一、将 5 μl 待测样品溶液滴加到三角形纸片上；二、在空气中自然晾干 10 min；三、纸片后端施加 4 kv 的高压电，同时滴加 10 μl 的喷雾溶剂；四、样品分子溶于喷雾溶剂中并在电压的作用下在色谱纸尖端形成电喷雾，进入质谱检测。图 1-1. 纸喷雾离子源装置示意图和实物图

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 张梅君;王志强;黄学荪;;固体制剂溶出度的研究进展[J];中国药业;2009年08期

2 王晓辉;;药物溶出度的测定方法及其进展[J];天津药学;2006年02期

本文编号：2715707