三七总皂苷和阿司匹林基于花生四烯酸通路相互作用的机制研究

发布时间：2020-06-16 17:23

【摘要】：阿司匹林(aspirin,ASA)是冠状动脉动脉粥样硬化血栓性疾病抗血小板治疗的常用药物。ASA通过不可逆乙酰化环氧化酶(cyclooxygenase,COX),抑制花生四烯酸(arachidonic acid,AA)代谢,减少血栓素A2(thromboxane,TXA2)合成发挥抗血小板作用;同时,因其抑制胃黏膜前列腺素(prostaglandin,PG)合成等,可导致胃黏膜损伤。ASA服药后血小板高反应性与胃肠道不良反应影响了ASA临床疗效和安全性,降低了患者服药依从性。如何增强ASA抗血小板作用、减轻ASA导致的胃肠道损伤,是心血管领域关注的焦点。三七是化瘀止血的代表药,具有活血止血、化瘀生肌之效。三七总皂苷(Panax notoginseng saponin,PNS)是三七的有效组分。三七粉、三七总皂苷(PNS)及其制剂(血塞通胶囊等)被广泛应用于心血管疾病或兼有消化道损伤、出血的患者。课题组前期研究证实,PNS联合双抗(ASA+氯吡格雷)能进一步增强抗血小板聚集作用,并可减轻双抗诱导的胃黏膜损伤,其机制涉及降低血清TXA2、增加胃黏膜PGI2和PGE2水平。AA脂质代谢通路是存在于血小板和胃黏膜上皮细胞的共同通路。既往研究表明,AA通路脂质代谢物广泛参与血小板功能调控,并与胃黏膜损伤与修复密切相关。PNS抗血小板作用、减轻胃黏膜损伤的机制,是否涉及对AA代谢网络的调控?尚缺乏相关研究。围绕上述问题,我们提出“PNS通过调控AA代谢通路,增强ASA抗血小板作用、抑制ASA诱导的胃黏膜损伤”的假说。围绕此假说,开展了如下研究:(1)PNS联合阿司匹林干预稳定性冠心病合并慢性胃炎患者的随机对照研究;(2)PNS对ASA干预急性心肌梗死大鼠血小板活化和胃黏膜损伤的影响的实验研究。研究一PNS联合ASA干预稳定性冠心病合并慢性胃炎患者的随机对照研究目的:观察PNS联合阿司匹林对稳定性冠心病合并慢性胃炎患者血小板功能、胃肠道不良反应的影响。方法:采用单中心随机对照研究设计,纳入42例稳定性冠心病合并慢性胃炎的患者,随机分为对照组、治疗组(每组各21例)。对照组口服ASA(每日一次,每次100mg),治疗组口服ASA(每日一次,每次1OOmg)联合血塞通软胶囊(主要成分为PNS,每日两次,一次两粒),连续服用2个月。治疗期间,两组患者均继续西医常规治疗。主要疗效指标为2月后血小板功能(血小板聚集率、血小板CD62p、血小板GPⅡbⅢa)和胃肠道不良反应(消化不良程度评估量表评分)。次要疗效指标包括:①血栓弹力图AA和ADP抑制率;②血小板COX-1活性;③血小板COX-1蛋白表达;④血小板环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)水平;⑤血小板AA通路脂质代谢物水平;⑥血清胃动素、胃泌素。安全性指标为肝功能、肾功能、血常规、尿常规、心电图等。基线及治疗2月后评估主要疗效指标、次要疗效指标和安全性指标。试验全程记录不良事件。结果:两组患者性别、年龄、疾病史、用药情况等基线资料基本一致,组间具有可比性(P0.05)。2月后,与对照组相比,治疗组AA及ADP诱导的血小板聚集率均明显降低(P0.01,P0.05);治疗组血小板CD62p阳性表达率、平均荧光强度值及血小板GPⅡbⅢa平均荧光强度值均显著降低(P0.01);治疗组AA和ADP通路血小板抑制率明显升高(P0.01)。与ASA单用相比,PNS联合ASA可进一步抑制血小板COX-1活性和蛋白表达(P0.01),增加ADP诱导态血小板cAMP水平(P0.01)。与ASA单用相比,PNS联合ASA可提高胃肠道症状评分(P0.01)和满意度评分(P0.01)。血小板脂质组学分析表明,与单用ASA相比,PNS联合ASA治疗2月后,血小板AA-COX和AA-12-LOX代谢通路脂质TXB2(P0.01)、PGD2(P0.01)、PGE2(P0.05)、11-HETE(P0.05)、12-HETE(P0.01)、12-HEPE(P0.05)明显下调。PNS增强ASA抗血小板作用的机理,可能与抑制血小板AA-COX和AA-12-LOX代谢通路,降低血小板TXA2及12-HETE水平有关。结论:与ASA单用相比,PNS联合ASA能进一步抑制血小板活化,改善胃肠道症状,提高血清胃动素、胃泌素水平;PNS增强ASA抗血小板作用的机理可能与抑制血小板AA-COX和AA-12-LOX代谢通路、降低血小板TXA2及12-HETE水平有关。研究二PNS对ASA干预急性心肌梗死大鼠血小板活化和胃黏膜损伤的影响目的:观察PNS联合ASA对急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)大鼠血小板抑制及胃黏膜保护的作用,并通过AA代谢通路分析其作用机制。方法:通过结扎左冠状动脉前降支建立Wistar大鼠AMI模型,存活大鼠随机分为AMI模型组、PNS组、ASA组、PNS+ASA组,每组12只。另设假手术(sham)组12只。造模24小时后,各组灌胃给药,PNS组给与PNS(118.8mg/kg/d)30天;ASA组给与ASA(负荷剂量31.25mg/kg/d给药1天,维持剂量10.42mg/kg/d给药29天);PNS+ASA组联合用药30天;AMI模型组及sham组给与等量生理盐水30天。1月后,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色观察心肌梗死面积,光比浊法检测血小板聚集率,HE染色观察心肌病理改变,扫描电镜观察胃黏膜超微结构。通过液相色谱-质谱联用(liquid chromatograph-mass spectrometer,LC-MS)技术检测大鼠血小板TXA2、12-HETE和胃黏膜AA通路相关脂质代谢物水平。采用ELISA检测血小板COX-1活性及cAMP浓度,western blot法检测血小板COX-1蛋白表达。结果:与AMI组相比,PNS组、ASA组及PNS+ASA组大鼠心梗面积显著减小(P0.01),血小板聚集率显著降低(P0.01)。与ASA组相比,PNS+ASA组心肌梗死面积进一步减小(P0.01)、血小板聚集率进一步降低(P0.001)。与AMI组相比,PNS组、ASA组、PNS+ASA组血小板COX-1活性和表达均明显下降(P0.01)。与ASA组相比,PNS+ASA组血小板COX-1表达和COX-1活性进一步降低(P0.01),血小板脂质代谢物TXA2与12-HETE也进一步降低(P0.01)。ASA组大鼠出现胃黏膜损伤,以表面绒毛减少,大量上皮细胞脱落,固有层结缔组织暴露为特征。与ASA组相比,PNS+ASA组大鼠胃黏膜损伤明显减轻。胃黏膜脂质组学结果表明,与ASA组相比,PNS+ASA 组 AA-COX 代谢途径下游 6,15-diketo-13,14-dihydro-PGF1a、13,14-dihydro-15-keto-PGE2、PGE1上调(P0.01);AA-LOX下游LTC4下调(P0.01);氧自由基代谢产物 8-iso-PGF2a、8-iso-PGE2、8-iso-PGE2也明显降低(P0.01)。PNS促进胃黏膜AA-COX-PG代谢、抑制AA-LOX-LT及AA过氧化代谢,可能是PNS减轻ASA导致的胃黏膜损伤的潜在机制。结论:与ASA单用相比,PNS联合ASA能进一步降低血小板聚集率,机制可能与降低血小板TXA2和12-HETE有关。PNS能减轻ASA导致的胃黏膜的损伤,可能与促进胃黏膜AA-COX-PG代谢、抑制AA-LOX-LT及AA过氧化代谢有关。
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R965
【图文】：

们对血小板功能的调控因素认识有限，对血小板活化通路、血小板与内皮细胞胞相互作用的机制亦缺乏深入研宄。现有的抗血小板药物着眼于抑制血小板活激动剂，在降低冠状动脉血栓性疾病发病率及死亡率中的疗效确切ｍ，然而治余血栓风险和出血风险仍值得关注。逡逑最新研究发现，脂质作为一种功能活跃的小分子代谢物，能增强血小板促炎血栓形成作用，在动脉粥样硬化的发生和发展过程中发挥不可忽视的作用。脂性合成或外源性摄入的形式存在于血小板中，可作为细胞能量储备，并广泛参结构组建、血小板活化信号通路的调控。近年来，通过液相色谱－质谱联用（ｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ－ｍａｓｓ邋ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ，ＬＣ－ＭＳ）、脂质芯片等技术支撑，实现了对血、活化等状态脂质代谢物的高通量检测及功能分析，形成了血小板脂质组学研］。本文梳理血小板脂质相关的基础和临床研究，简述血小板脂质的分类与代谢讨脂质对血小板功能及血小板促炎效应的调控作用，试图为血小板介导的动脉血栓性疾病的形成机制和干预靶点提供新的视角。逡逑ｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ邋ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ逦ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ邋ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ逡逑

１血小板脂质逡逑１．１血小板脂质的分类逡逑血小板是机体独立的脂质代谢单元。血小板脂质的种类十分庞大，Ｓｌａｔｔｅｒ团队率逡逑先利用高分辨ＬＣ－ＭＳ对３名健康受试者的血小板进行脂质组学分析，发现正常血小板逡逑内包含８０００余种脂质。Ｐｅｎｇ等［１Ｇ】首次定量检测了邋Ｃ５７ＢＬ／６野生型小鼠血小板脂质组，逡逑发现血小板脂质种类繁多且含量差异巨大，血小板脂质约涵盖４００余类，其浓度值跨越逡逑７个数量级。根据现有的脂质数据库Ｈｕｍａｎ邋Ｍｅｔａｂｏｌｏｍｅ邋Ｄａｔａｂａｓｅ，ＬｉｐｉｄＭａｐｓ，逡逑ＬｉｐｉｄＨｏｍｅ，ＭＥＴＬＩＮ及美国国立卫生研究院“脂质代谢途径研究计划”提供的分类标逡逑准，人类血小板脂质主要分为脂肪酸类、甘袖脂类、甘油磷脂类、多聚乙烯类、孕烯醇逡逑酮脂类、糖脂类、鞘脂类、固醇酯类，其余丰度较低的脂质约占１４％。脂肪酸、甘油脂、逡逑甘油磷脂是丰度相对较高的三类脂质，约占血小板脂质总量的７１％［９］。逡逑卵磷脂逡逑

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本文编号：2716341