斑蝥酸钠对依鲁替尼在大鼠体内外代谢的影响

发布时间：2020-06-21 16:48

【摘要】：目的:建立高效液相色谱的方法同时检测血浆中依鲁替尼及代谢物PCI-45227,在大鼠体内、外水平上,观察斑蝥酸钠对依鲁替尼代谢的影响。方法:(1)采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);在柱温为35°C的条件下,以流速为1.0 mL·min~(-1)的水-乙腈-0.2%TFA体系为流动相;以卡马西平为内标,在碱性条件下乙酸乙酯萃取血浆;探针药物在234 nm波长下检测;依鲁替尼及其代谢物在258 nm波长下检测。(2)36只雄性SD大鼠随机分为A、B、C、D四组,每组9只。A组(探针药物对照组)按0.5 m L/kg的剂量腹腔注射生理盐水,B组(探针药物实验组)按0.025 mg/kg的剂量腹腔注射斑蝥酸钠注射液,连续给药10天,于第11天按5 m L/kg的剂量灌胃给予探针药物(浓度为4 mg/mL的美托洛尔和2 mg/mL的咪达唑仑混合液);C组(依鲁替尼对照组)按0.5 mL/kg的剂量腹腔注射生理盐水,D组(依鲁替尼实验组)按0.025 mg/kg的剂量腹腔注射给予斑蝥酸钠注射液,连续10天,于第11天按10mg/kg的剂量灌胃给予依鲁替尼。A组、B组在给予探针药物后不同时间点尾静脉取血,C组、D组在给予依鲁替尼后不同时间点尾静脉取血。用已建立的高效液相方法分别测定血浆中探针药物,依鲁替尼及其代谢物的浓度。用DAS 3.0程序计算主要药代动力学参数。(3)建立体外肝微粒体孵育体系,分别以美托洛尔、咪达唑仑和依鲁替尼作为底物,加入干预药斑蝥酸钠注射液孵育处理,以水-乙腈-0.2%TFA体系为流动相,以卡马西平为内标,分别检测美托洛尔、咪达唑仑和依鲁替尼的浓度,计算K_m,V_(max)和IC_(50)值,观察斑蝥酸钠对CYP2D6和CYP3A4酶的作用,以及对依鲁替尼体外代谢的影响。结果:(1)血浆探针药物、依鲁替尼及PCI-45227的浓度在10~2000 ng/mL范围内线性关系良好。美托洛尔标准曲线:y=0.1247x+0.0040(r=0.999 4);咪达唑仑标准曲线:y=0.1122x+0.0149(r=0.999 3);依鲁替尼标准曲线:y=0.0597x+0.0039(r=0.999 7),PCI-45227标准曲线:y=0.1493x+0.0028(r=0.999 5)。低中高三个浓度的日内、日间精密度RSD15%;以上血浆样品常温下放置4 h、4°C放置24 h,反复冻融三次、冰冻条件下保存30天仍具有良好的稳定性。(2)A组、B组美托洛尔的C_(max)分别为(613.55±92.37)和(998.46±120.14)ng/mL;AUC_((0-∞))分别为(4881.10±2120.79)和(7745.15±1383.88)ng·h/m L;咪达唑仑的C_(max)分别为(1111.98±86.88)和(1298.05±64.91)ng/mL;AUC_((0-∞))分别为(6624.46±1680.99)和(8970.28±3219.13)ng·h/m L。结果显示,给予斑蝥酸钠后,探针药物的C_(max)和AUC_((0-∞))均明显增加,斑蝥酸钠可以增加探针药物的血浆暴露。提示斑蝥酸钠抑制依鲁替尼的代谢。C组、D组依鲁替尼的C_(max)分别为(1019.43±74.88)和(1333.71±65.18)ng/m L;AUC_((0-∞))分别为(10956.72±2491.09)和(13447.88±1038.44)ng·h/m L;PCI-45227的C_(max)分别为(230.59±15.36)和(167.28±38.99)ng/mL;AUC_((0-∞))分别为(3203.80±345.78)和(2443.95±680.71)ng·h/m L。结果显示,给予斑蝥酸钠后,依鲁替尼的C_(max)和AUC_((0-∞))均明显增加,代谢物PCI-45227的C_(max)和AUC_((0-∞))均明显降低,斑蝥酸钠可以增加依鲁替尼的血浆暴露,减少PCI-45227的血药浓度。提示斑蝥酸钠抑制依鲁替尼在大鼠体内的代谢。(3)体外肝微粒体孵育探针药物和依鲁替尼浓度在10~2000 ng/mL范围内具有良好的线性关系。美托洛尔标准曲线:y=0.0729x+0.0306(r=0.9993),测得美托洛尔V_(max)=1.21 nmol/min/mg pro,K_m=35.74μmol·L~(-1),斑蝥酸钠对CYP2D6的IC_(50)=1.7477μg·ml~(-1);咪达唑仑标准曲线:y=0.0825x+0.0331(r=0.999 1),V_(max)=0.62 nmol/min/mg pro,K_m=20.04μmol·L~(-1),斑蝥酸钠对CYP3A4的IC_(50)=1.7789μg·ml~(-1);依鲁替尼标准曲线:y=0.0842x+0.0212(r=0.999 1),V_(max)=2.53 nmol/min/mg pro,K_m=36.46μmol·L~(-1),斑蝥酸钠抑制依鲁替尼的IC_(50)=1.90157μg·ml~(-1)。结论:(1)本研究建立的检测大鼠血浆探针药物以及检测依鲁替尼和PCI-45227的HPLC分离完全,专属性高,检测时间快,适合药代动力学和药物相互作用的研究。(2)斑蝥酸钠在体内可以抑制探针药物和依鲁替尼的代谢,增加美托洛尔、咪达唑仑及依鲁替尼的血浆暴露。(3)建立的体外微粒体孵育体系,准确可靠、简便快速,适用于大鼠肝微粒体CYP2D6和CYP3A4酶活性的研究。斑蝥酸钠抑制大鼠微粒体CYP2D6和CYP3A4酶的活性。
【学位授予单位】：河南科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R965

【参考文献】