维生素K1固体自乳化缓释片成型技术与生物药剂学评价研究

发布时间：2020-07-14 01:02

【摘要】：液态油性药物作为治疗药物大家族的一员,却因为自身不溶于水、吸收差、生物利用度低和难以制备成为稳定的口服制剂等因素而限制其发展成药。因此利用制剂技术将液态油性药物制备成为功能性口服固体制剂,成为近年来越来越多制剂工作者关注的热点。制备稳定且含油量高,具有高生物利用度的口服固体制剂是药剂研究者不断努力实现的目标。本论文在课题组前期研究的基础上,以抗凝血杀鼠剂特效解毒药维生素K1(VK1)为模型药物,结合自乳化药物递送系统、液固技术(liquisolid technology)和粉末直接压片技术制备了口服维生素K1自乳化缓释片剂。VK1是目前临床上治疗维生素K1依赖性凝血因子缺乏症的主体药物,也是长效抗凝血类杀鼠剂(LAAR)的特效解毒药。临床上使用的VK1主要为注射剂型,维生素K1的不良反应(ADR)报道在逐年增加,尤其以注射形式给药的不良反应为主,VK1注射给药的不良反应事件正越来越被重视。为临床安全用药考虑,开发出维生素K1合理的替代给药方式很有必要,口服是解决维生素K1不良反应的重要途径。相比注射液,片剂减少了大量的不良反应,病人依从性也大大提高,但每天2-4次的给药频率较高。另外,长效抗凝血类杀鼠剂具有长达数月的半衰期,患者在治疗脱离危险期后,还需要一直给予药物治疗一段时间,因此开发出一天服用一次的维生素K1口服缓释片成为临床的需求。在课题组前期研究的基础上,选择吐温-80(TW-80)作为表面活性剂,选择聚乙二醇-400(PEG-400)作为助表面活性剂,把VK1作为油相制备了液体自乳化药物递送系统。通过绘制三元相图,确定各组分的范围分别为:VK1为10%-40%,TW-80为50%-80%,PEG-400为10%-40%。在绘制三相图的基础上,利用星点设计优化处方,结合自乳化能力、分散后乳滴粒径以及载药量考虑,最后确定最优L-SNEDDS处方的质量比为VK1为25%(油),TW-80为50%(表面活性剂),PEG-400为25%(助表面活性剂)的三组分混合物。制备的L-SNEDDS为黄色均匀的澄清液体,搅拌条件下在水中可以自发形成均匀稳定的浅黄色纳米乳剂。马尔文粒度仪测定分散后的纳米乳的平均粒径为21.15 nm,API为0.114。透射电子显微镜(Transmission electron microscope,TEM)下的扫面图也可以看出纳米乳滴的粒径在20 nm左右。分散过程中,随着温度和搅拌速度的增加,纳米乳形成的速度越快,在不同介质中形成的纳米乳滴的速度和粒径相差不大。放置考察L-SNEDDS的稳定性结果可以得知,纳米乳在24 h内不仅能够保持稳定不析出,而且乳滴的粒径也没有增大。选择具有大比表面积的吸附剂将L-SNEDDS吸附成为固体粉末的技术是将液态油性药物固体化的重要手段,本课题选择无水磷酸氢钙作为固体吸附剂,通过液固技术把制备的L-SNEDDS转变为液固粉末。根据液固粉末理论知识,通过测定吸附一定量液体后粉末的滑动角确定Φ值,而当滑动角为33.33°的时候,粉末有最佳的流动性和可压性。根据测量结果计算得到固体吸附剂无水磷酸氢钙的质量为L-SNEDDS质量的1.365倍。药代动力学实验结果表明,维生素K1在经过自乳化处理之后,可以明显增加药物的入血速度,生物利用度是不经过处理片剂的两倍。因为市面上口服的维生素K1规格为5mg/片和10mg/片,而自乳化处理后药物的生物利用度提高了一倍,所以后续制备的维生素K1缓释片规格选择2.5 mg/片。选择羟丙基甲基纤维素(Hydroxypropyl Methyl Cellulose,HPMC)作为骨架材料和阻滞剂,选择乳糖和微晶纤维素(Microcrystalline cellulose,MCC)作为赋形剂,利用粉末直接压片技术制备VK1自纳米乳化药物递送系统片剂。通过单因素考察不同类型HPMC对骨架缓释片的释放的影响。随着HPMC用量的增加,药物释放减少,综合结果来看单独使用一种HPMC其释放效果并不理想,所以选择以HPMC K100LV和K4M作为联合骨架材料,进行处方考察。利用星点设计优化处方,确定选择混合阻滞剂的比例为HPMC K4M和HPMC K100LV的量都为总片重的15%。经过优化处方和小试工艺验证之后,确定了中试的处方和工艺,进行了三批放大实验,从外观、性状、鉴别、含量、含量均匀度、有关物质和体外释放等方面进行检查,结果三批片各指标检查均符合标准。通过影响因素试验和加速实验考察本品的稳定性和对贮存条件提供参考,影响因素试验结果提示本品应密封避光贮藏。通过中试放大,确定了生产的工艺流程,并对生产中的工艺参数进行了确定和优化。建立了比格犬血浆中维生素K1含量测定的HPLC-MS/MS方法,选择上市的维生素K1普通片(5mg/片)Mephyton~?作为参比制剂,进行了比格犬体内药代动力学研究。课题组制备的维生素K1自乳化缓释片相比于参比制剂在比格犬体内的T_(max)延迟、C_(max)降低、MRT延长,说明所研制的控释制剂在比格犬体内具有缓释效果,相对于对照品维生素K1片的相对生物利用度为97.16%±18.93%。查询国内外文献可知,除本课题对VK1自乳化骨架缓释片的研究外,均未见相关报道,因此本课题具有较高的创新性和研究价值。本课题研究通过结合SNEDDS、液固压缩技术和粉末直接压片技术制备了口服维生素K1自乳化缓释片剂,不仅能够达到很好的缓释作用,而且可以减少患者服药的差异性以及顺应性。通过本研究可以得知自乳化药物递送系统是提高药物生物利用度可行的技术手段,利用固体吸附剂固化是将液态药物制备成为固体剂型完美的方法,这为液态油性药物的开发提供了很好的思路。
【学位授予单位】：军事科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R943
【图文】：

扫描图,紫外吸收光谱,扫描图

图 1.1 VK1 的紫外吸收光谱扫描图果显示，VK1(乙醇溶液)在 190~400 nm 波长范围内有多个特征吸收5 版中国药典中 VK1 含量的测定方法，选择 254 nm 作为含量测定的.1.2 色谱条件的确定器：Waters Alliance 高效液相色谱仪（waters 2489 紫外检测器，wate，empower2 软件）谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱(Thermo-C18，5 μm，4.6×250 mm)测波长：254 nm温：35℃动相：无水乙醇:水=95:5速：1.2 mL/min样量： 10 μL.1.3 线性和范围密称取维生素 K1 对照品适量，以流动相溶解并稀释成浓度为 1.25

回归曲线,含量测定,回归曲线,维生素

图 1.2 VK1 含量测定回归曲线：所得方程为：A=15104C-10750（n=6），相关系数 R= 1.00~201.28 μg/mL 范围内线性相关性好。.4 精密度.4.1 重复性操作，取本品 10 片，精密称定记录片重，研钵中充分研细约相当于维生素 K1 2.5 mg）置于 25 mL 棕色容量瓶中，用，稀释定容后得供试溶液，制备 6 份；另精密称取维生素 K1溶解并稀释成浓度为 100 μg/mL 的 VK1 对照液。以建立的外标法以峰面积计算。结果表明该方法的精密度考察结果的要求，结果见表 1.1。表 1.1 精密度试验结果 1 2 3 4 5 61581176 1565791 1566501 1544244 1566360 1537

扫描图,维生素K1,紫外吸收光谱,扫描图

军事科学院硕士学位论文声使药物溶解分散，以流动相稀释定容，同法测定。按外标法有关物质检查方法1 检测波长的确定称量 VK1 对照品约 10 mg，置 100 mL 容量瓶中，以流动相溶解匀。使用紫外分光光度计在 200-400 nm 范围内扫描。结果见图配制空白辅料溶液（除不含维生素 K1 外，其余均与本品片芯成m微孔滤膜过滤后使用紫外分光光度计在200～400 nm波长范围见图 1.4。

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