溶剂和依法韦仑对P450作用于标准底物的代谢活性的影响

发布时间：2020-07-15 10:53

【摘要】：临床上,许多患者会同时服用多种药物,因此临床医师必须谨慎用药,以避免发生药物-药物相互作用(Drug-Drug interaction,DDI)。药物-药物相互作用主要与细胞色素P450酶(cytochrome P450,CYP450)的抑制或诱导有关系[1]。细胞色素P450酶的抑制可能会导致作为受害者的药物的代谢受阻,降低其体内清除率,从而使该药物的体内暴露量增加,引起毒性反应。相反,细胞色素P450酶的诱导可能会使受害者药物的代谢加快,使其在体内的清除加快,体内暴露量降低,从而无法达到药效,使得药物失去其基本作用。介于药物-药物相互作用对药物在体内代谢及处置过程产生的重要影响,在FDA和CFDA颁布的临床前研究指导中已经明确要求在新药临床研究申请(IND)时递交的研究资料要包含DDI研究[2][3]。药物代谢酶种类繁多,其中细胞色素P450酶家族是最重要的代谢酶家族之一,其参与了市场上大约75%的药物的代谢。因此由细胞色素P450酶介导的DDI是重点考察对象。常用的细胞色素P450酶相关的模型有细胞色素P450重组酶、肝微粒体、S9、肝细胞等。由于筛选阶段化合物的溶解性问题,在体外应用细胞色素P450酶进行抑制研究时,或多或少会引入一些有机溶剂。然而,由于有机溶剂会使酶蛋白变性,影响酶活,因此有机溶剂的量必须控制在一定范围内[4]。本论文应用肝微粒体研究细胞色素P450酶的抑制实验、考察有机溶剂对五种重要的细胞色素P450酶的标准底物的代谢活性的影响,同时对CYP3A4的激活实验方法进行研究,其内容主要包括:1)对以肝微粒体为材料,采用混合底物法研究细胞色素P450酶的抑制实验中有机溶剂甲醇、乙腈、DMSO对五种重要细胞色素P450酶(CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6和CYP3A4)活性的影响进行考察,以优化实验条件。2)利用人肝微粒体为材料,对已知的CYP3A4激活剂依法韦仑进行研究,考察依法韦伦对CYP3A4对其标准底物咪达唑仑代谢活性的影响,建立本实验室评价CYP3A4激活的实验方法。同时应用该方法,对新药研发中发现的新化合物实体对CYP3A4的激活作用进行研究。
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R96
【图文】：

微粒体,肝微粒体,研究背景,步骤

文第一章研究背景CYP450脏匀浆后得到的肝细胞中滑面内质网碎片融合谢酶，又称肝药酶。细胞色素P450酶是肝微制备过程大致总结如下：（1）将新鲜的肝脏在500g离心力下，4℃离心10分钟左右，取，4℃离心20分钟；（4）取步骤（3）中的上个小时，该步骤得到的沉淀即为肝微粒体。大

同工酶,相对含量,化合物,分子结构

硕士学位论文第一章中含有各种代谢酶类，包括细胞色素P450酶、黄素单氧化酶；其中，最重要的是细胞色素P450酶。药物在体内的代谢反应反应，是指对化合物分子结构本身的修饰，如氧化和还原反应团结合到化合物分子结构中，如葡糖糖醛酸与于芳香族的羟基得到极性更强、水溶性更好的产物，从而使化合物更容易通过胆是对机体的一个自我保护策略。细胞色素P450酶是最重要的一族中包含多种CYP同工酶（见图2[5]）。

药物代谢,同工酶,百分比,底物浓度

图3 CYP同工酶参与药物代谢的相对贡献百分比Figure 3. Percentage of drugs metabolized by different CYP isoforms0酶动力学及影响因素反应动力学是研究酶促反应速度及其影响因素的科学。酶促反应的酶的浓度、底物的浓度、pH、温度、抑制剂和激活剂等。典型的米氏方程来描述。在酶浓度一定的条件下，当底物浓度很小时，酶未应速度取决于底物的浓度，底物浓度越大，单位时间内酶底物复合该阶段的反应符合一级反应动力学。当底物浓度加大后，酶逐渐被底的增加和底物浓度就不成正比，继而底增加至极大值，所有酶分子均应速度不会增高（反应接近零级反应）。酶促反应速度的因素很多，比如：反应温度、辅酶浓度、底物浓度激活剂等等。在新药研发初期，常常用微粒体为材料，体外考察在50

【参考文献】