亮菌口服液对5—氟尿嘧啶导致小鼠肠黏膜损伤的影响及相关机制研究
发布时间：2020-07-22 21:51
【摘要】：目的:研究亮菌口服液(armillariella oral solution,AOS)对5-FU(5-fluorouracil,5-FU)导致小鼠肠黏膜损伤的影响及可能的机制。方法:60只C57BL/6小鼠被随机分为6组:正常组,模型组,亮菌口服液低剂量组(1 ml/kg),中剂量组(5 ml/kg),高剂量组(10 ml/kg),阳性对照组(双歧杆菌450 mg/kg)。正常组予以生理盐水进行腹腔注射7天,并于腹腔注射前1周开始予以生理盐水灌胃(共14天),模型组、亮菌口服液组和阳性对照组均接受5-FU腹腔注射7天(50 mg/kg),分别于化疗前1周开始接受生理盐水、亮菌口服液及双歧杆菌溶液灌胃,共14天。治疗过程中观察小鼠饮食、活动、毛发、体重等一般情况,治疗结束24小时后处死小鼠。小鼠肠组织用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色检测肠黏膜损伤情况;异硫氰酸荧光素-葡聚糖(fluorescein isothiocyanate-dextran,FITC-Dextran)示踪法检测肠黏膜通透性;酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血浆中内毒素含量;细菌平板计数法检测肠道细菌移位情况;免疫组织化学染色(immunohistochemistry,IHC)检测肠道紧密连接蛋白带状闭合蛋白-1(zonula occluden 1,ZO-1),咬合蛋白Occludin,肠隐窝细胞增殖抗原Ki-67,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase-3),富含亮氨酸重复序列G蛋白偶联受体5(leucinerich repeat containing G protein-coupled receptor5,Lgr5)的表达情况;TdT介导的dUTP缺口末端标记法(tdt-mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL)检测肠隐窝细胞的凋亡情况。结果:1.模型组HE染色提示小鼠肠黏膜损伤显著,绒毛萎缩融合,隐窝加深或消失,大量炎性细胞浸润;与模型组相比,AOS中、高剂量组小鼠肠黏膜损伤减轻,绒毛和隐窝部分恢复,少量炎性细胞浸润。2.与正常组相比,模型组血浆中FITC-Dextran及内毒素含量显著升高(P0.05),肠道细菌移位率明显升高(P0.01);与模型组相比,AOS中、高剂量组小鼠血浆中FITC-Dextran及内毒素含量显著降低(P0.05),肠道细菌移位率明显降低(P0.05)。3.与正常组相比,免疫组织化学染色示模型组肠道紧密连接蛋白ZO-1,Occludin的表达明显下降(P0.01),Ki-67及Lgr5表达降低(P0.01),Caspase-3表达升高(P0.01);与模型组相比,AOS中、高剂量组小鼠ZO-1,Occludin蛋白表达显著升高(P0.01),Ki-67及Lgr5表达升高(P0.01),Caspase-3表达降低(P0.01)。4.与正常组相比,TUNEL染色提示模型组肠隐窝凋亡细胞增加(P0.01);而与模型组相比,经亮菌口服液治疗后肠隐窝的凋亡细胞明显减少(P0.01)。结论:1.亮菌口服液能缓解5-FU导致的小鼠肠黏膜损伤,可能与降低肠黏膜的通透性,抑制内毒素和细菌移位有关;2.亮菌口服液能缓解5-FU导致的小鼠肠黏膜损伤,可能与上调肠隐窝细胞中Lgr5的表达,来抑制肠隐窝细胞凋亡,恢复隐窝细胞增殖有关。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R965
【图文】：
小鼠出现死亡现象，可能与药物反应及灌胃处理不当有关：模型组小鼠出现 3 只死亡，亮菌口服液低剂量组死亡 2 只，中剂量组死亡 1 只，高剂量组无死亡，双歧杆菌组死亡 1 只，正常组小鼠无死亡。故后续检测结果从化疗结束后存活小鼠中随机选取 6 只进行统计分析。3.1 各组小鼠一般情况正常组小鼠饮食、活动正常，受刺激后反应灵敏，毛发有光泽，体质量持续增加，大便正常。模型组小鼠化疗后第 5、6 天，饮食及活动减少，受刺激后反应迟钝，体质量呈明显下降趋势（P<0.01），有中度或重度腹泻症状。与模型组相比，AOS 中、高剂量组及双歧杆菌组小鼠体质量下降程度减轻（P<0.05），腹泻程度也明显减轻（P<0.05），受刺激反应和活动尚可；低剂量 AOS 组与模型组相比，小鼠体质量变化差异无统计学意义（P>0.05）（见图 1A-B）。
而模型组小肠肠管颜色发黑，弹性较差，充血及水肿情况明显；AOS高剂量组及双歧杆菌组可见肠管损伤明显减轻，肠腔轻、中度水肿，无明显出血，弹性尚可。见图2。图 2 各组小鼠肠组织肉眼观察Fig 2 Visual observation of intestinal tissues in each group of miceA：正常组；B：模型组；C：AOS 低剂量组 1 ml/kg；D：AOS 中剂量组 5 ml/kg ；E：AOS高剂量组 10 ml/kg ；F：双歧杆菌组 450 mg/kg3.3 各组小鼠肠组织病理改变通过HE染色检测小鼠空肠组织病理学变化。如图3所示，与正常组相比，模型组有严重的组织损伤，包括绒毛的萎缩，变形或者消失，肠隐窝加深，甚至丢失，炎症细胞浸润，及细胞空泡化和水肿。然而，中剂量组绒毛高度有所恢复，隐窝变浅，炎症细胞浸润减少，高剂量组绒毛高度恢复，隐窝排列整齐，各层结构相对清晰完整。由此提示亮菌口服液给药组缓解了5-FU诱导的肠黏膜损伤，并且可能呈现剂量依赖性。另外，双歧杆菌组也明显缓解了化疗所致的肠黏膜损伤。同时，通过组织病理学评估，AOS治疗组肠黏膜镜下评分分别为2.33
高剂量组 10 ml/kg ；F：双歧杆菌组 450 mg/kg3.3 各组小鼠肠组织病理改变通过HE染色检测小鼠空肠组织病理学变化。如图3所示，与正常组相比，模型组有严重的组织损伤，包括绒毛的萎缩，变形或者消失，肠隐窝加深，甚至丢失，炎症细胞浸润，及细胞空泡化和水肿。然而，中剂量组绒毛高度有所恢复，隐窝变浅，炎症细胞浸润减少，高剂量组绒毛高度恢复，隐窝排列整齐，各层结构相对清晰完整。由此提示亮菌口服液给药组缓解了5-FU诱导的肠黏膜损伤，并且可能呈现剂量依赖性。另外，双歧杆菌组也明显缓解了化疗所致的肠黏膜损伤。同时，通过组织病理学评估，AOS治疗组肠黏膜镜下评分分别为2.33
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R965
【图文】：
小鼠出现死亡现象，可能与药物反应及灌胃处理不当有关：模型组小鼠出现 3 只死亡，亮菌口服液低剂量组死亡 2 只，中剂量组死亡 1 只，高剂量组无死亡，双歧杆菌组死亡 1 只，正常组小鼠无死亡。故后续检测结果从化疗结束后存活小鼠中随机选取 6 只进行统计分析。3.1 各组小鼠一般情况正常组小鼠饮食、活动正常，受刺激后反应灵敏，毛发有光泽，体质量持续增加，大便正常。模型组小鼠化疗后第 5、6 天，饮食及活动减少，受刺激后反应迟钝，体质量呈明显下降趋势（P<0.01），有中度或重度腹泻症状。与模型组相比，AOS 中、高剂量组及双歧杆菌组小鼠体质量下降程度减轻（P<0.05），腹泻程度也明显减轻（P<0.05），受刺激反应和活动尚可；低剂量 AOS 组与模型组相比，小鼠体质量变化差异无统计学意义（P>0.05）（见图 1A-B）。
而模型组小肠肠管颜色发黑，弹性较差，充血及水肿情况明显；AOS高剂量组及双歧杆菌组可见肠管损伤明显减轻，肠腔轻、中度水肿，无明显出血，弹性尚可。见图2。图 2 各组小鼠肠组织肉眼观察Fig 2 Visual observation of intestinal tissues in each group of miceA：正常组；B：模型组；C：AOS 低剂量组 1 ml/kg；D：AOS 中剂量组 5 ml/kg ；E：AOS高剂量组 10 ml/kg ；F：双歧杆菌组 450 mg/kg3.3 各组小鼠肠组织病理改变通过HE染色检测小鼠空肠组织病理学变化。如图3所示，与正常组相比，模型组有严重的组织损伤，包括绒毛的萎缩，变形或者消失，肠隐窝加深，甚至丢失，炎症细胞浸润，及细胞空泡化和水肿。然而，中剂量组绒毛高度有所恢复，隐窝变浅，炎症细胞浸润减少，高剂量组绒毛高度恢复，隐窝排列整齐，各层结构相对清晰完整。由此提示亮菌口服液给药组缓解了5-FU诱导的肠黏膜损伤，并且可能呈现剂量依赖性。另外，双歧杆菌组也明显缓解了化疗所致的肠黏膜损伤。同时，通过组织病理学评估，AOS治疗组肠黏膜镜下评分分别为2.33
高剂量组 10 ml/kg ；F：双歧杆菌组 450 mg/kg3.3 各组小鼠肠组织病理改变通过HE染色检测小鼠空肠组织病理学变化。如图3所示，与正常组相比，模型组有严重的组织损伤，包括绒毛的萎缩，变形或者消失，肠隐窝加深，甚至丢失，炎症细胞浸润，及细胞空泡化和水肿。然而，中剂量组绒毛高度有所恢复，隐窝变浅，炎症细胞浸润减少，高剂量组绒毛高度恢复，隐窝排列整齐，各层结构相对清晰完整。由此提示亮菌口服液给药组缓解了5-FU诱导的肠黏膜损伤，并且可能呈现剂量依赖性。另外，双歧杆菌组也明显缓解了化疗所致的肠黏膜损伤。同时，通过组织病理学评估，AOS治疗组肠黏膜镜下评分分别为2.33
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本文编号：2766398
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