氯胺酮导致肾脏氧化损伤及抗氧化剂褪黑素的保护作用机制研究

发布时间：2020-08-08 08:20

【摘要】：目的:基于氧化应激的角度,探讨氯胺酮导致的肾脏氧化损伤及抗氧化剂褪黑素在其中的保护作用机制。方法:选取雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠32只,按照随机数字表法平均分为4组即空白对照组、氯胺酮干预组、褪黑素干预组及氯胺酮+褪黑素干预组,每天各组大鼠分别予以生理盐水、氯胺酮30mg/kg、褪黑素5mg/kg和氯胺酮30mg/kg+褪黑素5mg/kg。采用腹腔注射每天一次,每只大鼠注射量总体积为1ml,连续12周,注射量根据每周两次测大鼠体重以调整。每次给药后观察大鼠活动约1小时,12周后麻醉处死大鼠取出肾脏组织,采用比色法检测肾组织氧化相关指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,行组织学苏木精-伊红染色法(HE)及马松染色(Masson)观察肾组织病理改变,通过TUNEL法检测肾脏组织细胞的凋亡情况,应用Western Blotting检测抗氧化蛋白核转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)和血红素氧化酶-1(HO-1)蛋白表达水平。结果:给药12周后,氯胺酮干预组大鼠的体型与体重量均明显较其余各组小,排尿次数及活动增多,氯胺酮+褪黑素干预组发现增加褪黑素干预后可明显改善大鼠排尿及活动增多症状。与空白对照组比,氯胺酮干预组中肌酐、尿素氮及MDA含量升高而SOD及GSH-Px降低,肾组织中可见大量炎症细胞浸润,多处局灶性坏死,甚至出现肾小球萎缩、封闭,间质有条索状纤维及出现明显的肾组织细胞凋亡。褪黑素干预组大鼠肾组织仅示SOD、GSH-Px及Nrf2、HO-1蛋白表达升高,未见肾损害。与氯胺酮干预组相比,氯胺酮+褪黑素干预组中MDA含量明显下降,SOD、GSH-Px及Nrf2、HO-1表达量显著升高,少见炎症肾组织浸润、肾小球萎缩、间质纤维化及细胞凋亡等肾损害。结论:氯胺酮长期作用可导致大鼠肾脏氧化应激损伤,引起大量炎症细胞的浸润,肾单位破坏,上皮细胞凋亡甚至间质纤维化等病理改变。褪黑素可有效拮抗氯胺酮导致的肾脏氧化应激损伤,可显著提高抗氧化蛋白表达保护肾组织,改善肾功能以及减少上皮细胞凋亡,其机制可能与增加Nrf2、HO-1的蛋白表达水平有关。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R965
【图文】：

尿素氮,肌酐,褪黑素,氯胺酮

图 1 各组大鼠血清肌酐及尿素氮水平条图Figure1 serum creatinine and urea nitrogen levels in each group注：数据以均数±标准差（ s ）表示，与空白对照组比，＊P <0.05；与氯胺酮干预组比，＃P <0.05；与褪黑素干预组比，￡P <0.05，（n=8/组）。

HE染色,氯胺酮,褪黑素,肾小球

氯胺酮+褪黑素干预组中大鼠炎症细胞浸润减少，肾小球及肾小管尚完整，间质破坏不明显（图 2D）。Masson 染色切片示，与空白对照组相比，氯胺酮干预组可见肾间质胶原纤维含量增多染色加深（图2a/b），而与空白对照组比，褪黑素干预组与氯胺酮+褪黑素干预组胶原染色几乎无明显差别，未见明显的间质纤维化，仅在黏膜下层和肌层之间有少量染成蓝色的正常纤维组织（图 2c/d）。氯胺酮长期作用下可导致肾组织结构破坏甚至导致纤维增生，而褪黑素对肾组织有保护作用。图 2 大鼠肾组织 HE 染色(A-D)及 Masson 染色结果(a-d)Figure2 renal HE staining(A-D)and Masson staining(a-d)results in rats注：氯胺酮干预组可见肾组织大量炎症细胞（细箭头所示），肾小球萎缩、封闭（星号所示），可见胶原染色加深及有条索状纤维形成（粗箭头）；氯胺酮+褪黑素干预组则可见炎症细胞浸润减少（细箭头所示），肾小球及肾小管尚完整，与空白对照组几乎无差别（粗箭头）。

褪黑素,氯胺酮,肾组织,凋亡细胞

图 3 各组大鼠肾组织凋亡细胞病理图及半定量结果。Figure3 apoptosis cytopathology and semi-quantitative results of renal tissue in each group注：各组肾组织凋亡细胞病理图在 400 倍镜下观察，阳性细胞呈棕黄色，染色质浓缩；数值以均数±标准差表示，与空白对照组比，＊P < 0.05；与氯胺酮干预组比，＃P < 0.05；与褪黑素干预组比，￡P < 0.05。

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