绿侧花海葵肽的体外抗氧化性及护肝作用机制研究

发布时间：2020-08-10 15:43

【摘要】：课题组前期研究从绿侧花海葵中获得一条5个氨基酸寡肽(Anthopleura anjunae Peptide,AAP-H),其对肝细胞可能具有增殖活性。本实验测定AAP-H的抗氧化活性,研究AAP-H对正常人肝细胞Chang Liver细胞化学性损伤的保护作用,并探讨AAP-H对四氯化碳(CCl_4)引起的小鼠急性肝损伤模型的保护作用及其机制。首先,测定AAP-H对DPPH自由基、ABTS自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基的清除率,以维生素C(Vc)的清除率为对照,分别计算AAP-H与Vc对各自由基的清除率的IC_(50),对比抗氧化能力。结果表明,AAP-H及Vc分别对DPPH自由基清除率的IC_(50)为10.3 mg/mL、7.54μg/mL;对ABTS自由基清除率的IC_(50)为6.29μg/mL、4.80μg/mL;对羟自由基清除率的IC_(50)为0.983mg/mL、1.16 mg/mL;对超氧阴离子自由基清除率的IC_(50)为116μg/mL、52.6μg/mL。其次,建立由CCl_4诱导的Chang Liver细胞化学损伤模型,采用MTT法测定AAP-H作用后的增殖率,用倒置显微镜观察细胞形态变化及修复能力。以8Mm CCl_4对Chang Liver细胞造成肝损伤模型,200μg/mL AAP-H对其的增殖率为40.4%,倒置显微镜观察的形态及划痕实验表明,AAP-H对Chang Liver细胞由CCl_4造成的损伤具有一定修复作用。最后,建立急性CCl_4诱导的小鼠肝损伤模型。检测其血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)活性水平,肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)含量,肝脏组织石蜡切片,进行病理学观察和微观结构观察,Western blotting实验检测蛋白表达的影响。结果表明,AAP-H可降低血清中ALT、AST活性,抑制肝组织中MDA上升,上调SOD和GSH-Px,降低Bax、Caspase-3、Caspase-9、AIF和Fatty Acid Synthase蛋白表达,升高Bcl-2蛋白表达,并且在病理学变化及微观结构中可见,其对小鼠肝组织的修复作用。
【学位授予单位】：浙江海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R965
【图文】：

清除率,级别,自由基清除,统计软件

2.2.5 数据处理实验数据均采用 x±s 表示，采用 SPSS19.0 统计软件进行 ANOVA 分析和Probit 分析。2.3 结果2.3.1 DPPH 自由基清除率的测定由图 2-1 可知，Vc 对 DPPH 自由基的清除能力很强，在微克级别，而 AAP-H几乎要达到毫克级别才能用本方法测定出对 DPPH 自由基的清除能力，AAP-H与 Vc 的 IC50分别为 10.3 mg/mL、7.54 μg/mL。与对照组 Vc 相比，AAP-H 的 IC50远大于 Vc，AAP-H 具有较弱的清除 DPPH 自由基的能力。

快相,清除率,自由基,对照组

随着浓度的增加，Vc度ABTS自由基的清除率相比AAP-H增加更快相同条件下，当 Vc 浓度为 7 μg/mL 时清除率已接近最大值因此 Vc 的 IC50较 AAP-H 更低。两者 IC50分别为 6.29 μg/mL、4.80 μg/mL。与对照组 Vc 相比，AAP-H 的 IC50是Vc 的 1.3 倍，AAP-H 具有较强的清除 ABTS 自由基的能力。

清除率,羟自由基,超氧阴离子自由基

图 2-3AAP-H 与 Vc 对羟自由基的清除率Fig.2-3 Scavenging rate of ·OH free radicals by the polysaccharide from AAP-H and Vc2.3.4 超氧阴离子自由基清除率的测定由图 2-4 可知，随浓度的增加，Vc 对超氧阴离子自由基的清除率的变化率逐渐降低，及低浓度时变化率较快，高浓度时增加率缓慢，浓度为 200 μg/mL 时才打到峰值。而 AAP-H 在一定浓度范围内，对超氧阴离子的清除率几乎为一级反应（线性关系），当浓度为 80 μg/mL 左右时即打到峰值。但由于这种特性，Vc 的 IC50仍旧较高，两者 IC50分别为 116 μg/mL、52.6 μg/mL。与对照组 Vc 相比，AAP-H 的 IC50是 Vc 的 2.2 倍，AAP-H 具有较强的清除超氧阴离子自由基的能力。

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