越橘花青素片的研制

发布时间：2020-08-20 16:43

【摘要】：随着计算机化社会中视频显示终端(VDT)的集中工作,视疲劳的预防和缓解成为当下重要的研究领域。视疲劳是通过疲劳、眼睛红眼、眼痛、视力模糊和偶尔头痛等方式体现的,这些非特异性症状表现出来的眼科疾病是一种技术压力综合征。花青素为水溶性天然无毒色素,其保护视力作用已被广泛研究,但是国内针对越橘花青素的研究大部分局限于花青素的粗提取物的制备及其结构鉴定,关于纯化工艺、改善花青素稳定性及其去翳明目的制剂的研究较少。因此,研制越橘花青素制剂具有重要的意义。本课题的研究内容主要包括以下几部分:1.越橘花青素的制备1.1越橘花青素提取工艺研究本课题以花青素提取率为考察指标,以越橘果为试验原料,采用乙醇浸提法,设计单因素试验考察不同酸化剂、乙醇体积分数、料液比、提取时间、提取温度和pH值,根据单因素试验结果选取乙醇体积分数、提取温度和提取时间这三个因素设计Box-Behnken组合试验,并采用响应曲面法确定乙醇浸提花青素最佳工艺参数为:乙醇体积分数为50%、料液比为1:30、温度为62℃、提取时间为60min、pH为1.50。1.2越橘花青素纯化工艺研究本课题以花青素静态吸附率和静态解吸率为考察指标,对D101、AB-8、聚酰胺、Amberlite XAD7四种树脂进行筛选,最终采用大孔树脂D101对越橘花青素粗提物进行纯化工艺研究。以越橘花青素动态吸附率和动态解吸率为考察指标,在前期试验研究的基础上,对越橘花青素大孔树脂纯化工艺条件进行优化,确定纯化工艺为:取6BV pH1.5上样液(3.81mg/ml),通过D101树脂柱,上样流速为1ml/min,先用2BV蒸馏水除杂,再用5BV的pH1.0的70%酸性乙醇洗脱,收集洗脱液。1.3越橘花青素干燥工艺研究本课题采用真空冷冻干燥法对花青素溶液进行干燥,并以外观性状和花青素含量为优化指标,确定真空冷冻干燥过程中应加入谷胱甘肽和蔗糖作为稳定剂,来提高花青素的稳定性和减少活性成分的流失。2、越橘花青素片的制备工艺研究2.1花青素微囊的制备工艺研究本课题以花青素包埋率为考察指标,选择阿拉伯胶和玉米肽(1:1)作为壁材进行研究,分别对包埋温度、包埋时间、壁芯比和壁材浓度进行单因素考察,从而确定最佳包埋工艺参数为包埋温度为20℃,包埋时间为15min,壁芯比为3:1,壁材浓度为2%。2.2制剂成型工艺研究2.2.1剂量的确定:参考文献~([1]),确认越橘花青素治疗视觉受损的起效量为每日50mg,通过对不同越橘花青素处方量的成型比较,确定每片越橘花青素处方量为50%,片重为1.0g,越橘花青素片用量为:一日两次,一次2片。2.2.2辅料的筛选:通过对辅料(填充剂、润滑剂、崩解剂)种类及其比例的单因素筛选,本制剂最优处方为(1000片量):越橘提取物(500g),甘露醇(184g)、SuperTab24AN(276g)、低取代羟丙纤维素(30g)、硬脂酸镁(10g),采用粉末直接压片法压片。3.质量标准的建立本课题对越橘果、越橘提取物和越橘花青素片中花青素进行了含量测定,并进行方法学考察。本课题采用高效液相法对越橘提取物进行了定性指纹图谱研究,初步建立了本品的指纹图谱,并进行了方法学验证和相识度评价。并采用对照品图谱对本品的指纹图谱进行指认,确定了其中花青素3个特征峰的位置,得出越橘提取物对照指纹图谱,有13个主要共有峰,飞燕草素为参照峰。并利用UPLC快速分离和Q-TOF/MS准确性优势,对越橘提取物中的小分子活性化合物进行了UPLC-ESI-Q-TOF/MS定性筛查。本课题同时对本制剂进行了性状、片重差异、崩解时限及微生物限度检查。结果表明,该标准简便、易行,能有效控制本制剂的质量。对越橘提取物和越橘花青素片进行影响因素试验、3个月加速稳定性试验和3个月长期试验,结果表明,花青素溶液应在避光、低温且酸性的条件下保存,避免与金属离子共存且本制剂3个月内基本稳定。稳定性研究还在继续进行中。4.初步药效学试验通过建立视网膜光学损伤模型,发现越橘花青素可以有效提高光损伤大鼠视网膜细胞的SOD、GSH-Px活性及总蛋白含量,显著降低MDA含量。表明越橘花青素对视网膜光损伤具有一定的保护作用,其可能的机制之一是通过增加清除自由基的作用阻止细胞脂质过氧化。综上所述,越橘花青素片达到了《中国药典》对片剂的要求,为剂量小、疗效高的固体制剂。
【学位授予单位】：江西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R943
【图文】：

乙醇,体积分数,花青素,提取率

取越橘冻干粉100g，于55℃的水浴条件下，分别用30倍量pH2(盐酸调节pH)的40%、50%、60%、70%、80%的乙醇浸提30min，滤过，合并滤液，得总提取液。按“2.1.2.2”下方法测定含量，计算花青素提取率，结果见表2-2和图2-2。表2-2 乙醇体积分数考察结果Table 2-2 Results of ethanol volume fraction乙醇体积分数/% 40 50 60 70 80花青素提取率/% 53.66±0.36 56.79±0.84 54.21±0.19 54.39±0.24 53.84±0.21图2-2 乙醇体积分数考察结果Figure 2-2 Results of ethanol volume fraction如图可知：花青素提取率在乙醇体积分数为50%时最高，而在其他浓度中的溶解度均较低。因此选择乙醇体积分数为50%。③料液比的考察取越橘冻干粉100g，于55℃的水浴条件下，分别用10、20、30、40、50倍量pH2(盐酸调节pH)的50%的乙醇浸提30min，滤过，合并滤液，得总提取液。按“2.1.2.2”下方法测定含量，计算花青素提取率，结果见表2-3和图2-3。表2-3 料液比考察结果Table 2-3 Results of material-liquid ratio inspection料液比 10 20 30 40 50花青素提取率/% 49.79 54.42 60.79 55.65 53.29

花青素,提取率,越橘,冻干粉

12图2-3 料液比考察结果Figure2-3 Results of material-liquid ratio inspection如图可知：越橘冻干粉（g）与提取剂（ml）用量比例为1:30时，花青素提取率最高，因此选择越橘冻干粉（g）与提取剂（ml）用量比例为1:30。④提取温度的考察取越橘冻干粉100g，分别于35℃、45℃、55℃、65℃、75℃的水浴条件下，用30倍量pH2(盐酸调节pH)的50%的乙醇浸提30min，滤过，合并滤液，得总提取液。按“2.1.2.2”下方法测定含量，计算花青素提取率，结果见表2-4和图2-4。表2-4 提取温度考察结果Table 2-4 Results of extraction temperature inspection温度/℃ 35 45 55 65 75花青素提取率/% 58.40 59.13 60.15 61.71 55.27图2-4 提取温度考察结果Figure 2-4 Results of extraction temperature inspection如图可知：随着温度的升高，花青素提取率呈先升后降的趋势，温度在65℃时提取率最高

提取温度,提取率,花青素

取越橘冻干粉100g，分别于35℃、45℃、55℃、65℃、75℃的水浴条件下，用30倍量pH2(盐酸调节pH)的50%的乙醇浸提30min，滤过，合并滤液，得总提取液。按“2.1.2.2”下方法测定含量，计算花青素提取率，结果见表2-4和图2-4。表2-4 提取温度考察结果Table 2-4 Results of extraction temperature inspection温度/℃ 35 45 55 65 75花青素提取率/% 58.40 59.13 60.15 61.71 55.27图2-4 提取温度考察结果Figure 2-4 Results of extraction temperature inspection如图可知：随着温度的升高，花青素提取率呈先升后降的趋势，温度在65℃时提取率最高，因此确定提取温度为65℃。

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