紫杉醇与雷帕霉素对人主动脉平滑肌细胞炎性细胞因子表达及增殖的影响

发布时间：2020-08-26 07:11

【摘要】：随着动脉粥样硬化(artherosclerosis,AS)发病率及死亡率逐年增高,经皮冠状动脉支架置入术成为治疗史上的一大突破,现已成为治疗AS的常规手段。介入术后3个月内20%左右的支架内再狭窄(in-stent restenosis,ISR)率可导致其它不良心血管事件发生,药物涂层支架(drug-eluting stents,DES)的广泛应用使ISR率有所下降,但10%~20%的ISR率仍然是制约DES置入后临床效果的主要因素。国内外上市的DES携带的涂层药物主要为紫杉醇和雷帕霉素,二者均通过抑制平滑肌细胞(smooth muscle cell,SMC)过度增殖而预防ISR。然而,这两种药物是否会通过引发支架置入处炎症反应而影响SMC功能并由此导致ISR形成目前尚不清楚。本论文以人主动脉平滑肌细胞(human arterial smooth muscle cell,HA-VSMC)为细胞模型,采用细胞生物学、ELISA、实时荧光定量PCR等技术,对DES涂层药物是否影响SMC功能进行研究。实验主要包括:1)使用不同浓度氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导HA-VSMC不同时间,确定建立AS体外细胞模型最佳诱导条件;2)检测不同浓度DES涂层药物作用后,AS体外细胞模型炎性细胞因子释放和细胞增殖能力;3)抗体干预法降低炎性细胞因子表达,并检测其对DES涂层药物作用下的AS体外细胞模型增殖能力影响,从而分析基于SMC的ISR形成机制。主要得到以下研究结果:1)不同浓度ox-LDL诱导HA-VSMC不同时间,通过检测总胆固醇含量、胆固醇酯含量和生长活力发现,20μg/mL ox-LDL诱导细胞48h,细胞内胆固醇酯/总胆固醇超过50%,且此时细胞处于活力较高的增殖期,因此可作为建立AS体外细胞模型的最佳诱导时间和浓度。2)DES涂层药物可引发并加重炎症反应并导致SMC异常增殖。DES涂层药物紫杉醇和雷帕霉素作用下的AS体外细胞模型,促炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达显著增加(随药物浓度增加逐渐升高),抑炎性细胞因子IL-10、IL-35、TGF-β表达显著降低(随着药物浓度增加逐渐降低);在涂层药物浓度增至1μg/ml时,细胞增殖能力降至最低点,却仍高于正常SMC。3)人为干扰炎性细胞因子表达水平后检测AS体外细胞模型增殖能力发现,IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-10、TGF-β为置入DES后引发ISR的潜在直接因子;紫杉醇通过增加促炎因子IL-6、TNF-α和降低抑炎因子IL-10、TGF-β的表达使SMC异常增殖;雷帕霉素通过增加促炎因子IL-6、IL-1β和降低抑炎因子IL-10、TGF-β的表达使SMC异常增殖。DES涂层药物紫杉醇和雷帕霉素可引发并加重病态细胞的炎症反应,并由此导致SMC异常增殖,由此表明支架涂层药物可能会通过引发并加重支架置入处炎症反应而引起ISR。这与ISR发生机制密切相关,并可能提示了ISR发生的潜在机制。本研究结果揭示了早期抗炎治疗有益于DES置入后临床效果和预后,并提供潜在ISR治疗靶点,对ISR防治具有重要的理论意义和现实意义。
【学位授予单位】：昆明理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R96
【图文】：

管腔,粥样硬化,重吸收,内膜增生

图 1- 1 支架置入后 ISR 发生概述Figure 1-1 The overview of ISR after stent placement.3 对动脉粥样硬化支架内再狭窄预防的探索研究发现不同的支架置入后（包括 BMS 和不同药物涂层的 DES），ISR 发生间和程度有明显差别，但目前对存在差别的原因仍不甚清楚。有学者认为，S 或 DES 置入后不同的病理修复过程导致了 ISR 形成时间与程度差别。BMS后会出现三个时期生物反应：早期 ISR（6 个月以内）、中期 ISR 缓解（6 个3 月）、晚期血管腔 ISR 复发（4 年以后）[76]。BMS 置入初期，血管壁会形成较厚的新生内膜，造成一定程度上的管腔丢失；随着时间的增加，血管会进膜重建和细胞外基质重吸收的中期修复阶段，减轻早期由内膜增生和管腔丢致的 ISR；随着时间的进一步推进，支架内形成纤维增生和 ISNA，从而使再次发生。而与此不同的是 DES 置入后血管生理反应和修复模式。DES 置

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图 2- 1 第二章实验方案Figure 2-1 experimental scheme实验试剂与材料表 2- 1 实验试剂与材料Table 2-1 experiment reagent and meterial试剂与材料来源SMC清酶链霉素双抗M/F12 培养基昆明理工大学医学院病原微生物实验室SigmaSigmaHyCloneHyClone四川西陇化工有限公司

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x-LDL 诱导不同时间 HA-VSMC 内 TC 含量变化s in the total cholesterol content of HA-VSMC from different time of L induction过程中，CE 的积累起着不可忽视的作用，因此进一步检出 CE 含量。与 TC 含量结果相似的是，与对照组相比，μg/ml、20μg/ml）诱导 HA-VSMC 不同时间（36h、48h、60使 FC 含量下降，CE 含量大幅增加（P<0.05），并与时间、图 2-5）。

【参考文献】