HPLC法与微生物法测定人血浆中去甲万古霉素浓度的差异比较
发布时间：2020-09-09 19:22
目的:比较高效液相色谱(HPLC)法与微生物法测定人血浆中去甲万古霉素浓度的差异。方法:分别使用HPLC法与微生物法对人血浆中去甲万古霉素浓度进行检测,回顾性分析两种技术的临床测结果。结果:两种方法所测得结果的回归方程为y=0.992 7x+0.155 8(r=0.997 6),比较去甲万古霉素血药浓度的检测结果差异无统计学意义(P0.05)。结论:HPLC法与微生物法均为较有效且可靠的去甲万古霉素血药浓度检测技术。各医院在对去甲万古霉素进行血药浓度检测时,可根据医院自身的条件选择相应的检测方法。
【部分图文】：
血浆标准溶液，每份4ml，一份置于－20℃冷冻，一份置于室温条件下，并分别于0、2、4、8、12h取样，进行离心处理，进样20μl，对去甲万古霉素的浓度进行测定，检测样品的稳定性。结果显示，置室温和冷冻条件下的测定结果基本一致。可知，在室温和反复冻融条件下去甲万古霉素血浆样本均具有良好的稳定性，测定过程中不需要加以特殊保护[2]。2.1.7专属性试验分别取患者血浆样品400μl和空白血浆400μl，加入20％ZnSO4溶液400μl，涡旋混合2min，以转速为500r/min离心10min，取上清液20μl进样测定，记录色谱图（图1）。由图1可见，去甲万古霉素保留时间为7.07min，且色谱峰与空白血浆中内源物质分离度高，分离效果良好。051015t，minB100806040200－10AUm1251007550250－20AUm212051015t，minA图1去甲万古霉素HPLC图A.空白血浆；B.患者血浆；1.去甲万古霉素；2.ZnSO4Fig1HPLCchromatogramofnorvancomycinA.blankplasma；B.patient’splasma；1.norvancomycin；2.ZnSO42.2微生物法2.2.1标准溶液的配制准确称取去甲万古霉素标准品50mg，用灭菌的磷酸盐缓冲液（pH6.0）配制成质量浓度为1000μg/ml的溶液，并用空白血浆将其稀释成质量浓度为为5、10、15、20、40、60μg/ml的标准溶液[2]。2.2.2菌悬液的配制取CMCC（B）枯草芽孢杆菌，按《中国药典》2010年版附录方法[3]配制。2.2.3含菌平板制备将已灭菌的抗生素检定培养基Ⅷ号加热融化，待冷却至60℃时加入适量枯草芽孢杆菌悬液，摇匀，用灭菌吸管吸取20ml，注入已消毒的直径为90mm的抗生素测定专用平皿中，摊布均匀，用陶瓦盖覆盖，静置待凝固。2.2.4打孔加样制好的平皿冷却凝固后，用内径为3mm的不锈钢管打6个孔?
中国药房2015年第26卷第26期ChinaPharmacy2015Vol.26No.262.3统计学方法通过SPSS17.0软件分析和处理所得数据。计数资料采用χ2检验；计量资料以x±s表示，通过单因素方差分析法进行统计学处理。如果所得分析结果示P＜0.05，可以证实两组数据资料比较差异具有统计学意义。2.4HPLC法与微生物法实际血样测定结果比较取30名应用去甲万古霉素患者的血液样本，分别通过HPLC法与微生物法进行血药浓度检测，结果见表2。以HPLC法测得的结果为横坐标，微生物法测得的结果为纵坐标作图，并进行线性回归分析，结果见图2。两种方法所测得结果的回归方程为y＝0.9927x+0.1558（r＝0.9976），表明两种检测方法具有较为理想的相关性。对两种方法的检测结果进行统计学分析，得P＞0.05，表明两种检测方法比较差异无统计学意义。表2两种检测方法血药浓度测定结果（μg/ml）Tab2Resultsofcontentdeterminationofsamplesby2kindsofmethod（sμg/ml）序号12345678910HPLC法19.327.3111.678.4322.4453.6030.6511.3841.3015.87微生物法19.127.3511.507.7323.0153.1030.7711.8541.9615.12序号11121314151617181920HPLC法13.149.5632.1435.877.5738.4540.2310.546.1059.30微生物法13.059.4532.0135.217.5538.8740.0110.556.0556.11序号21222324252627282930HPLC法14.899.8916.8625.698.4230.3347.1050.5428.3010.55微生物法15.909.1817.6825.208.4428.5647.2050.2027.209.816050403020100得生物法测微血药浓度，μg/ml020406080HPLC法?
【部分图文】：
血浆标准溶液，每份4ml，一份置于－20℃冷冻，一份置于室温条件下，并分别于0、2、4、8、12h取样，进行离心处理，进样20μl，对去甲万古霉素的浓度进行测定，检测样品的稳定性。结果显示，置室温和冷冻条件下的测定结果基本一致。可知，在室温和反复冻融条件下去甲万古霉素血浆样本均具有良好的稳定性，测定过程中不需要加以特殊保护[2]。2.1.7专属性试验分别取患者血浆样品400μl和空白血浆400μl，加入20％ZnSO4溶液400μl，涡旋混合2min，以转速为500r/min离心10min，取上清液20μl进样测定，记录色谱图（图1）。由图1可见，去甲万古霉素保留时间为7.07min，且色谱峰与空白血浆中内源物质分离度高，分离效果良好。051015t，minB100806040200－10AUm1251007550250－20AUm212051015t，minA图1去甲万古霉素HPLC图A.空白血浆；B.患者血浆；1.去甲万古霉素；2.ZnSO4Fig1HPLCchromatogramofnorvancomycinA.blankplasma；B.patient’splasma；1.norvancomycin；2.ZnSO42.2微生物法2.2.1标准溶液的配制准确称取去甲万古霉素标准品50mg，用灭菌的磷酸盐缓冲液（pH6.0）配制成质量浓度为1000μg/ml的溶液，并用空白血浆将其稀释成质量浓度为为5、10、15、20、40、60μg/ml的标准溶液[2]。2.2.2菌悬液的配制取CMCC（B）枯草芽孢杆菌，按《中国药典》2010年版附录方法[3]配制。2.2.3含菌平板制备将已灭菌的抗生素检定培养基Ⅷ号加热融化，待冷却至60℃时加入适量枯草芽孢杆菌悬液，摇匀，用灭菌吸管吸取20ml，注入已消毒的直径为90mm的抗生素测定专用平皿中，摊布均匀，用陶瓦盖覆盖，静置待凝固。2.2.4打孔加样制好的平皿冷却凝固后，用内径为3mm的不锈钢管打6个孔?
中国药房2015年第26卷第26期ChinaPharmacy2015Vol.26No.262.3统计学方法通过SPSS17.0软件分析和处理所得数据。计数资料采用χ2检验；计量资料以x±s表示，通过单因素方差分析法进行统计学处理。如果所得分析结果示P＜0.05，可以证实两组数据资料比较差异具有统计学意义。2.4HPLC法与微生物法实际血样测定结果比较取30名应用去甲万古霉素患者的血液样本，分别通过HPLC法与微生物法进行血药浓度检测，结果见表2。以HPLC法测得的结果为横坐标，微生物法测得的结果为纵坐标作图，并进行线性回归分析，结果见图2。两种方法所测得结果的回归方程为y＝0.9927x+0.1558（r＝0.9976），表明两种检测方法具有较为理想的相关性。对两种方法的检测结果进行统计学分析，得P＞0.05，表明两种检测方法比较差异无统计学意义。表2两种检测方法血药浓度测定结果（μg/ml）Tab2Resultsofcontentdeterminationofsamplesby2kindsofmethod（sμg/ml）序号12345678910HPLC法19.327.3111.678.4322.4453.6030.6511.3841.3015.87微生物法19.127.3511.507.7323.0153.1030.7711.8541.9615.12序号11121314151617181920HPLC法13.149.5632.1435.877.5738.4540.2310.546.1059.30微生物法13.059.4532.0135.217.5538.8740.0110.556.0556.11序号21222324252627282930HPLC法14.899.8916.8625.698.4230.3347.1050.5428.3010.55微生物法15.909.1817.6825.208.4428.5647.2050.2027.209.816050403020100得生物法测微血药浓度，μg/ml020406080HPLC法?
【参考文献】
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【共引文献】
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3 张文娟;宋新文;汪洋;许琼;刘p
本文编号：2815368
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