苯乙双胍对人口腔角质形成细胞炎症反应的作用及机制初探

发布时间：2020-09-17 18:42

　　 目的:评估苯乙双胍(Pheformin)对由佛波酯(12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate,TPA)以及聚肌胞苷酸(polyinosinic:polycytidylic acid,Poly(I:C))诱导的人口腔角质形成细胞(human oral keratinocytes,HOKs)炎症反应的作用并探究其产生作用的机制。方法:(1)体外实验(InVitro):分别采用5ug/mlTPA及10ug/mlPoly(I:C)诱导HOKs炎症反应2小时后,加入不同浓度(0.5mM/L,1.0mM/L,1.5mM/L)苯乙双胍干预22小时,采用荧光定量多聚核苷酸链式反应(Quantitative Real-time PCR,RT-PCR)和酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,Elisa)检测包括白介素 6(interleukin-6,IL-6)、白介素 8(interleukin-8,IL-8)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)等相关炎症因子以及激活转录因子 3(activating transcription factor 3,ATF-3)在 RNA 水平的表达量变化;并通过蛋白质印迹法(Westem-Blot)检测ATF-3,AMP依赖的蛋白激酶(adenosine 5'-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK)及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路中细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)在蛋白水平的表达量变化。(2)半体内实验(ExVivo):采用100ug/mlPoly(I:C)诱导人牙龈组织块炎症反应2小时后,加入不同浓度(1.5mM/L,3.0mM/L,6.0mM/L)苯乙双胍干预22小时,采用RT-PCR检测IL-6、IL-8、TNF-α等相关炎症因子在RNA水平的表达量变化。结果:(1)体外实验 RT-PCR 和 Elisa 结果显示 5ug/ml TPA 及 10ug/ml Poly(I:C)以及0.5mM/L,1.0mM/L,1.5 mM/L苯乙双胍对于人口腔角质形成细胞无明显毒性;TPA及Poly(I:C)能够诱导人角质形成细胞中IL-6、IL-8、TNF-α等相关炎症因子在RNA水平的表达量增加,苯乙双胍能够有效抑制这些炎症因子表达水平的增加,苯乙双胍抑制炎症因子表达的效果随着其浓度的增加愈发明显。体外实验RT-PCR和Western-Blot结果显示苯乙双胍促进了人角质形成细胞中ATF-3表达量的增加并且抑制了 MAPK信号通路中p-Erk蛋白的表达。(2)半体内实验RT-PCR结果显示苯乙双胍能够以浓度依赖的方式抑制由100ug/ml Poly(I:C)诱导的人牙龈组织块中IL-6、IL-8、TNF-α等相关炎症因子在RNA水平的表达量增加。结论:苯乙双胍以浓度依赖性方式促进ATF-3的产生以及抑制p-Erk信号通路,从而能够对由TPA及Poly(I:C)引起的人口腔角质形成细胞炎症反应产生抗炎作用,抑制包括IL-6、IL-8和TNF-α在内的炎症因子表达。苯乙双胍在治疗牙龈炎和牙周炎等牙周病以及扁平苔藓和慢性盘状红斑狼疮等口腔颌面部其他炎症类疾病上具有一定的临床意义。
【学位单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R96
【部分图文】：

图１倒置相差显微镜观察分离培养的ＨＯＫｓ（ＸｌＯＯ）．逡逑Ｆｉｇ．ｌ邋Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ邋ｐｈｏｔｏｇｒａｐｈｓ邋ｏｆ邋ｃｕｌｔｕｒｅｄ邋ＨＯＫｓ（ＸｌＯＯ）．逡逑

不同浓度（0．５ｍＭ／Ｌ，邋１．０ｍＭ／Ｌ，邋１．５ｍＭ低人口腔角质形成细胞中白介素６邋（Ａ）、白介的表达量增加的表达量。＞＜０．０５，＋＞＜０．０１广＞ｈｏｗｅｄ邋ｔｈａｔ邋Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ邋（０．５ｍＭ／Ｌ，邋ｌ．Ｏｉｔｅｄ邋ｔｈｅ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｏｆ邋ＩＬ－６（Ａ），邋ＩＬ－８（Ｂ）邋ａｎｄ邋ＴＮＦ－ａａｎｎｅｒ．邋／？＜０．０５，邋＾＜０．０１，逦ｐ＜０．００１．逡逑

Ｔ－ＰＣＲ结果显示，不同浓度（０．５ｍＭ／Ｌ，邋ｌ．ＯｍＭ／Ｌ，邋１．５ｍＭ／Ｌ）苯乙依赖方式降低由５ｕｇ／ｍｌ邋ＴＰＡ诱导的人口腔角质形成细胞炎症反应中白、白介素８邋（Ｂ）、肿瘤坏死因子ａ邋（Ｃ）的表达量增加。＞＜０．０５／＞＜０．００１．逡逑邋ＲＴ－ＰＣＲ邋ｓｈｏｗｅｄ邋ｔｈａｔ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ邋（０．５ｍＭ／Ｌ？邋ｌ．ＯｍＭ／Ｌ，邋１．５ｍｏｒｍｉｎ邋ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ邋５ｕｇ／ｍｌ邋ＴＰＡ－ｉｎｄｕｃｅｄ邋ｔｈｅ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｏｆ邋ｐｒｏｉｎｆｌａｍｉｎｅｓ邋ｓｕｃｈ邋ａｓ邋ＩＬ－６（Ａ），邋ＩＬ－８（Ｂ）邋ａｎｄ邋ＴＮＦ－ａ（Ｃ）邋ｉｎ邋ＨＯＫｓ邋ｉｎ邋ａ邋ｄｏｓｅ－ｄｅｐｅｅｒ．邋＊ｐ＜０．０５，邋“ｐ＜０．０１，邋“ｐ＜０．００１．逡逑

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 邹德荣,林松,刘翳雯,戴其昌;牙周炎治疗对患者龈沟液IL-8水平的影响[J];口腔医学;2002年04期

2 吴亚菲,赵川江,张静仪;牙周治疗前后龈沟液中白细胞介素-6水平的变化[J];华西口腔医学杂志;2001年02期

本文编号：2821084