苯海索对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用研究

发布时间：2020-09-17 21:51

【摘要】：目的:探讨苯海索(trihexyphenidyl,THP)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用,为苯海索在脑卒中应用中奠定药理基础。方法:选用体重250~300 g SD大鼠行改良Longa线栓法致大鼠脑中动脉阻塞再灌注(MCAO/R)模型,造模成功的大鼠(Longa评分≥2分)纳入进入实验(约150只);大鼠行MCAO手术前30分钟腹腔注射药物苯海索高剂量(THP HD,0.5 mg·kg~(-1))、苯海索中剂量(THP MD,0.25 mg·kg~(-1))、苯海索低剂量(THP LD,0.125 mg·kg~(-1))、对照组依达拉奉(Edaravone,3 mg·kg~(-1))和假手术组(Sham,1 ml PBS);MCAO后24小时深度麻醉,取出大鼠脑组织对组织进行病理学TTC染色和尼氏染色;分别在24小时、72小时取出大鼠脑组织对相关蛋白进行免疫组化以及Western blot分析;中长期实验,大鼠接受MCAO/R后每天给药一次,连续16天监测大鼠mNSS评分,在进行至第9天时行水迷宫试验。结果:各组大鼠在MCAO后24小时TTC染色病理学分析显示,预给药依达拉奉和高剂量苯海索的大鼠脑组织损伤侧梗死面积统计分别为90871.5±26225.13、104577±23075.60,相比较于模型组梗死面积236839.25±35492.94显著降低(P?0.05),预给药依达拉奉和高剂量苯海索组相对梗死体积分数分别为27.6±7.6%、26.4±8.03%,相比较于模型组43.24±6.28%显著降低(P?0.05);尼氏染色显示,预给药依达拉奉和高剂量苯海索对比MCAO/R大鼠,大脑皮层和海马CA1区神经细胞尼氏小体数量显著增多,排列紧密;神经功能缺损评分(mNSS)监测显示,预给药依达拉奉和高剂量苯海索的大鼠在MCAO/R 72小时以后等时间点显著降低神经功能缺损评分,改善运动功能和行为;大鼠在MCAO/R后第9天进行的水迷宫实验,结果显示,定位航行实验中预给药依达拉奉和高剂量苯海索的大鼠随着训练次数增加显著降低潜伏期,第3天(依达拉奉和高剂量苯海索组的潜伏期分别是54.88±38.32秒、52.8±28.87秒)和第4天(依达拉奉和高剂量苯海索组的潜伏期分别是26.46±24.61秒、20.12±14.35秒)平均潜伏期相比模型组(第3天潜伏期91.46±29.91秒、第4天潜伏期51.75±26.30秒)显著降低(P?0.05),空间探索实验中,依达拉奉和高剂量苯海索给药的大鼠经过平台次数分别为3±1.41、3.5±1.70,相比较于模型组(1.36±0.75)显著增加(P?0.05)。MCAO 24小时后免疫组化和Western blot结果显示,预给药依达拉奉和高剂量苯海索增加细胞核内的Nrf2蛋白表达(依达拉奉和高剂量苯海索处理组免疫组化Nrf2阳性细胞IOD值和Western blot的Nrf2的蛋白IOD值相比模型组,P?0.05),激活Nrf2诱导其核易位,激活下游抗氧化蛋白HO-1表达(依达拉奉和高剂量苯海索处理组Western blot的HO-1蛋白表达条带IOD值均显著高于模型组,P?0.05),MCAO 72小时后免疫组化和Western blot结果显示预给药依达拉奉和高剂量苯海索显著降低脑组织中p-p38、NF-kB、NLRP3和cleaved-caspase-1相关蛋白表达(两组免疫组化p-p38、NF-kB、NLRP3阳性细胞IOD值均显著高于模型组,P?0.05)。结论:高剂量的苯海索(THP HD,0.5 mg·kg~(-1))和依达拉奉(3 mg·kg~(-1))均可减轻脑缺血再灌注诱发的病理损伤;大鼠脑缺血再灌注后进行长期监测,苯海索能改善大鼠脑缺血再灌注损伤后神经行为学,改善运动功能和学习记忆功能。MCAO/R损伤的早期,大鼠预给药依达拉奉和高剂量的苯海索药物均显著上调Nrf2/HO-1信号通路,同时抑制继发性炎症反应p38/NF-κB/NLRP3信号通路。
【学位授予单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R965
【图文】：

第一章 大鼠脑缺血再灌注动物模型的建立和评价 ECA 残端方向与 ICA 呈一条直线，在 ECA 靠近 CCA 的分叉处栓，线栓材质是 4-0 尼龙线，直径 28 μm，有一定硬度，且插入膨大的圆球状，插入深度约 18.5 ±0.5 mm 处时感到有阻力时停方结扎以防血管切口处渗血，取下止血钳，把分离的组织恢复保暖。手术后的大鼠经暖灯照射或者加热垫保暖，保持其肛温在后，在大鼠再次麻醉状态下拔出线栓并将颈外动脉下方的细线适量抗生素并标准缝合。将大鼠放回鼠笼，做好保暖措施，并假手术组进行术前麻醉，分离 CCA、ECA、ICA，只在 ECA 入线栓，作为无手术对照。

模型组的 Longa 评分为 2.83 ±0.68，假手术组评分均为 0，无损伤表现，两组进双侧检测 P 0.05，有较显著差异（如表 1-2 和图 1-2A）。将模型组大鼠和假手大鼠大脑组织整体进行 TTC 染色。结果如下图 1-2B 展示，中动脉阻塞再灌注后动脉控制的大脑颞叶、顶叶部分明显呈现白色。表 1-2 大鼠在 MCAO/R 后 24 小时的 Longa 评分（n=6）Tab.1-2 Longa score at 24 h after MCAO/R (n=6)Group Average SDSham 0 0MCAO/R* 2.833333 0.687184271Note: *: P < 0.05 vs. Sham group

鼠脑缺血再灌注 24 小时后脑组织切片 TTCral ischemia reperfusion in rats, TTC staining 后 24 小时 TTC 染色梗死面积和相对梗死体 area and relative infarct volume percentage ohours after MCAO/R in rats（n=4）Infract size Relative infar3975.50 ±2628.21 9.10 ±236839.25 ±35492.94* 43.24 ±Note: *: P < 0.05 vs. Sham group

【参考文献】

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本文编号：2821280