超声微泡联合壳聚糖修饰的多粘菌素B脂质体对生物膜态鲍曼不动杆菌的协同抗菌作用
发布时间：2020-10-22 12:53
第一部分壳聚糖修饰的多粘菌素B脂质体及脂质微泡的制备及性能检测目的制备微泡及壳聚糖修饰的多粘菌素B脂质体,并测定其一般特性。方法采用注入法制备壳聚糖修饰的多粘菌素B脂质体(c-PMB-Lip),并观察其形态,检测其粒径、电位、包封率、载药量及体外释放率等一般特性;采用机械震荡法制备脂质微泡(MB),并检测粒径、电位及其形态分布;随后通过静电吸附法制备微泡-壳聚糖修饰的多粘菌素B脂质体耦联体(MB-c-PMB-Lip),并用荧光显微镜检测其连接情况。结果制备的c-PMB-Lip粒径分布均匀,平均粒径为(215.2±5.03)nm,Zeta电位为(12.64±1.44)m V,包封率为(90.31±2.84)%,载药量为(15.62±1.97)%,且在24h内能够完全释放出抗菌药物,具有一定的缓释作用;MB粒径为(4.54±0.8)μm,电位为(-2.42±0.43)m V。荧光显微镜观察两者连接情况显示制备的携带正电电荷的载药脂质体均匀的分布在带负电的脂质微泡周围,形成带有红色荧光的花环样结构。结论本实验成功的制备了壳聚糖修饰的多粘菌素B脂质体,并将其与脂质微泡相连接,形成微泡-载药脂质体耦联体。荧光显微镜观察得出该耦联体粒径分布均匀,结合率高,提示其可作为体内外实验的药物研究基础。第二部分超声微泡联合壳聚糖修饰的多粘菌素B脂质体对生物膜态鲍曼不动杆菌的体外抗菌实验研究目的探究超声微泡联合壳聚糖修饰的多粘菌素B脂质体对生物膜态鲍曼不动杆菌的协同抗菌作用;探讨二者联合对细菌生物膜结构的影响。方法采用96孔板法培养细菌生物膜,微量肉汤稀释法测定不同多粘菌素制剂对临床分离鲍曼不动杆菌(AB)的最小生物膜抑制浓度(MBIC);采用结晶紫染色法及Alamar Blue法分别评价壳聚糖修饰的多粘菌素B脂质体组(c-PMB-Lip)、超声微泡+多粘菌素B组(USMB+PMB)、超声微泡+壳聚糖修饰的多粘菌素B脂质体组(USMB+c-PMB-Lip)对生物膜态AB的抗菌作用,并分析其抗菌效应的量效关系;采用24孔板法培养细菌生物膜,通过扫描电镜评价不同制剂对AB生物膜结构的影响。结果c-PMB-Lip对生物膜态AB的MBIC为(8.0±2.0)μg·m L-1;;超声微泡能增强抗菌药物多黏菌素B对生物膜态AB的抑制作用;而超声微泡联合脂质体制剂可得到更为显著的抗生物膜态AB效应,甚至可以完全清除生物膜态AB;各组随着药物浓度的增加,在一定范围内与其抗菌作用呈现量效关系;同无菌空白对照组相比,USMB+c-PMB-Lip在2μg/m L时几乎能够完全清除细菌生物膜并达到最大抗菌效应(P0.05);扫描电镜显示经超声微泡处理后AB生物膜表面形成由空化作用导致的散在小孔;多粘菌素B处理后仍可见大量生物膜结构,USMB+c-PMB-Lip处理后,生物膜清除十分明显,仅存散在个别细菌。结论超声微泡联合壳聚糖修饰的多黏菌素B脂质体对生物膜态AB具有显著的协同抗菌作用。
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R96
【部分图文】：
图 1.1 c-PMB-Lip 的粒径与 Zeta 电位分布（a. 粒径图 b. Zeta 电位）Figure 1.1 The size distribution and Zeta potential of c-PMB-Lip (a. size distribution b. Zetapotential)2.2 c-PMB-Lip 的包封率、载药量及体外释放率对硫酸多粘菌素 B 溶液在 200nm-400nm 的波长范围内进行紫外扫描，结果发现本品仅有末端吸收，而在 215nm 处，PMB 在 10～100 μg mL-1浓度范围内，线性良好，回归方程为 A=0.0095c+0.0022（r2=0.9993，n=6）（图 1.2），因此选择该波长为检测波长。而由于在该波长处，其他材料同样有吸收，因此预先采用超滤法滤去未结合的材料，再进行含量测定。由此，得到制备的载药脂质体包封率为（90.31±2.84）%，载药量为（15.62±1.97）%。由 PMB 及 c-PMB-Lip 体外释放结果显示，游离药物在 12h 以内能全部从透析介质中释放出来；而载药脂质体至 24h完全释放出抗菌药物，具有一定的缓释作用（图 1.3）。
图 1.3 PMB 及 c-PMB-Lip 累积体外释放结果（n=3）Figure 1.3 Drug cumulative release curves of PMB and c-PMB-Lip（ 脂质微泡的粒径电位及形态观察由机械震荡法制备的脂质微泡呈圆环状，外层为磷脂层包裹，中空泡状，分布较均匀，无聚集现象（图 2）。平均粒径为（4.54 （-2.42 0.43）mV（表 1.1）。 MB-c-PMB-Lip 的性质检测普通光学显微镜下观察微泡-脂质体耦联体因二者粒径相差较大要呈现微泡的圆环样结构，形态与普通微泡无明显差异（图 3）镜视野下，Dil 标记的载药脂质体呈现红色荧光。可见大量脂质记的微泡周围，形成红色花环样结构，除少数聚集外，其余均匀
100μL LB 培养基，随即加入 10μLAlamar Blue 试剂，混匀恒温培养 1h，多功能酶标仪测定每孔在 570nm 及 600nm 处式计算 Alamar Blue 还原率（%），以评价孔板内细菌存活率Alamar Blue 还原率（%）=（ 600 570）－（ 570 600）( 570′ 600) ( 600′ 570)100化型 Alamar Blue 在 570nm 波长的消光系数=80586化型 Alamar Blue 在 600nm 波长的消光系数=117216测孔在 570nm 波长的吸光度测孔在 600nm 波长的吸光度=还原型 Alamar Blue 在 570nm 波长的消光系数=155677=还原型 Alamar Blue 在 600nm 波长的消光系数=14652性对照孔在 570nm 波长的吸光度（培养基，Alamar Blue，性对照孔在 600nm 波长的吸光度（培养基，Alamar Blue，
【参考文献】
本文编号：2851626
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R96
【部分图文】：
图 1.1 c-PMB-Lip 的粒径与 Zeta 电位分布（a. 粒径图 b. Zeta 电位）Figure 1.1 The size distribution and Zeta potential of c-PMB-Lip (a. size distribution b. Zetapotential)2.2 c-PMB-Lip 的包封率、载药量及体外释放率对硫酸多粘菌素 B 溶液在 200nm-400nm 的波长范围内进行紫外扫描，结果发现本品仅有末端吸收，而在 215nm 处，PMB 在 10～100 μg mL-1浓度范围内，线性良好，回归方程为 A=0.0095c+0.0022（r2=0.9993，n=6）（图 1.2），因此选择该波长为检测波长。而由于在该波长处，其他材料同样有吸收，因此预先采用超滤法滤去未结合的材料，再进行含量测定。由此，得到制备的载药脂质体包封率为（90.31±2.84）%，载药量为（15.62±1.97）%。由 PMB 及 c-PMB-Lip 体外释放结果显示，游离药物在 12h 以内能全部从透析介质中释放出来；而载药脂质体至 24h完全释放出抗菌药物，具有一定的缓释作用（图 1.3）。
图 1.3 PMB 及 c-PMB-Lip 累积体外释放结果（n=3）Figure 1.3 Drug cumulative release curves of PMB and c-PMB-Lip（ 脂质微泡的粒径电位及形态观察由机械震荡法制备的脂质微泡呈圆环状，外层为磷脂层包裹，中空泡状，分布较均匀，无聚集现象（图 2）。平均粒径为（4.54 （-2.42 0.43）mV（表 1.1）。 MB-c-PMB-Lip 的性质检测普通光学显微镜下观察微泡-脂质体耦联体因二者粒径相差较大要呈现微泡的圆环样结构，形态与普通微泡无明显差异（图 3）镜视野下，Dil 标记的载药脂质体呈现红色荧光。可见大量脂质记的微泡周围，形成红色花环样结构，除少数聚集外，其余均匀
100μL LB 培养基，随即加入 10μLAlamar Blue 试剂，混匀恒温培养 1h，多功能酶标仪测定每孔在 570nm 及 600nm 处式计算 Alamar Blue 还原率（%），以评价孔板内细菌存活率Alamar Blue 还原率（%）=（ 600 570）－（ 570 600）( 570′ 600) ( 600′ 570)100化型 Alamar Blue 在 570nm 波长的消光系数=80586化型 Alamar Blue 在 600nm 波长的消光系数=117216测孔在 570nm 波长的吸光度测孔在 600nm 波长的吸光度=还原型 Alamar Blue 在 570nm 波长的消光系数=155677=还原型 Alamar Blue 在 600nm 波长的消光系数=14652性对照孔在 570nm 波长的吸光度（培养基，Alamar Blue，性对照孔在 600nm 波长的吸光度（培养基，Alamar Blue，
【参考文献】
相关期刊论文 前1条
1 朱婷;李永吉;;提高水溶性药物脂质体包封率制备方法的研究[J];黑龙江科技信息;2015年21期
本文编号：2851626
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/yiyaoxuelunwen/2851626.html
最近更新
教材专著
