抗登革病毒药物体外筛选模型的建立及FNC抗登革病毒的活性研究
发布时间：2020-10-29 14:48
登革病毒(Dengue virus,DENV)引起的登革热是一种急性传染病。近年来,由于流动人口的增加以及全球变暖,登革热的流行趋势日益严重。登革热被世界卫生组织列入被忽视的热带病之一,至今无特异性抗登革病毒药物上市。本研究首先选用利巴韦林作为阳性药物,通过DENV-Ⅱluc~+病毒复制子检测荧光素酶活性进行化合物初步筛选,筛选到的有效化合物通过噬斑实验进行复筛;再通过蛋白印迹实验验证化合物的有效性,最后采用MTT法检测该化合物的细胞毒性,从而建立抗登革病毒体外药物筛选模型。研究结果显示利巴韦林抑制DENV-Ⅱ的EC_(50)为40.78±1.02μM,结果与其他报道接近,成功建立稳定可靠的抗登革病毒体外药物筛选模型。利用该模型筛选了807个化合物,发现阿兹夫定(Azvudine,FNC)具有良好的抗DENV-Ⅱ活性。其次对FNC、盐酸阿兹夫定(Hydrochloride salt of azvudine,FNC-HCL)和三磷酸酯阿兹夫定(Triphosphate azvudine,FNC-TP)作用于DENV的体外抑制活性进行研究。结果发现FNC、FNC-HCL和FNC-TP抑制DENV复制的EC_(50)在25.42±6.70-0.54±0.29μM之间,同时测得阳性药物利巴韦林抑制DENV-Ⅱ的EC_(50)为40.78±1.02μM。蛋白印迹实验及定量结果显示FNC、FNC-HCL和FNC-TP均能抑制DENV E蛋白的表达,并且显著地抑制DENV病毒RNA的复制。说明F NC、FNC-HCL和FNC-TP在细胞水平和蛋白水平均能抑制DENV的复制,且抑制作用优于利巴韦林,通过对FNC进行分时给药及分时撤药实验,发现其作用于登革病毒RNA的合成阶段。FNC有望成为抗登革病毒的候选药物。最后对FNC的体内抗登革病毒活性进行研究。首先选用4-6周龄的BaBb/c小鼠脑内注射接种DENV-Ⅱ_(D1090)病毒株,小鼠出现体重减轻、弓背、后肢瘫痪等症状,成功建立小鼠感染模型。BaBb/c小鼠感染DENV后,以每天2mg/kg的剂量灌胃给药,发现FNC在感染DENV后的BaBb/c小鼠体内治疗效果欠佳。
【学位单位】：大理大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R965
【部分图文】：
第 1 章 绪论1 登革病毒与登革热1.1 登革病毒基因与结构DENV 为黄病毒科黄病毒属(Flavivirus)的重要成员，根据抗原性不同分为 4个血清型(DENVⅠ-Ⅳ)。黄病毒属也包括西部尼罗河病毒、蜱传脑炎病毒、基孔肯尼亚热病毒、黄热病病毒和日本脑炎病毒等[1]。DENV 基因全长约 10.7kb，是单股正链 RNA 病毒，含单一的开放阅读框，依次编码三种结构蛋白和七种非结构蛋白（Non-structural protein，NS）。其结构蛋白包括衣壳蛋白（Capsid protein，C）、膜蛋白（Membrane Protein and its Precursorspr，M/PrM）和包膜蛋白（Envelopeprotein，E），非结构蛋白包括 NS1，NS2a，NS2b，NS3，NS4a，NS4b 和 NS5蛋白[2](图 1)。
大、白细胞数量减少等。登革出血热（dengue hemorrhagic fever，DHF）是 DF的一种严重类型，临床表现为高热、严重出血、休克、血小板计数减少、血液浓缩，病死率高。同时伴有休克表现的登革出血热称为登革休克综合征(dengueshock syndrome，DSS)[15]。1.2.2 登革热流行情况DF 主要通过埃及伊蚊（Aedes aegypti）和白纹伊蚊（Aedes albopictus）传播。DF 全球分布较广，大致以 10℃等温线为界，分布于热带及亚热带地区；多发于中南美洲、中部非洲、南亚及东南亚（图 2）[16]。据估计，全球有 128 个国家，大约 39.7 亿人有感染 DENV 的风险，约占世界人口的一半[17]。最近几十年，全球登革热的发病率急剧上升，估计每年有 3.9 亿人口感染，其中有 9600 万人被确诊为不同严重程度的登革热，超过 12 万死亡[18]。
硕士学位论文 抗登革病毒药物体外筛选模型的建立及 FNC 抗登革病毒的体内外8 年，中国大陆共报告登革热 655324 例，造成 610 人死亡[19]。据监测系统统计中国从 2009 年到 2014 年，发病率范围为每 10 万人-3.4581，通报 52749 例登革热病例和 6 例死亡病例（图 3）[20]。近建、浙江、云南、台湾等地区也分别发生暴发流行，并且有输入性呈逐年増多的趋势。这些暴发造成了巨大的社会经济负担。
【参考文献】
本文编号：2861052
【学位单位】：大理大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R965
【部分图文】：
第 1 章 绪论1 登革病毒与登革热1.1 登革病毒基因与结构DENV 为黄病毒科黄病毒属(Flavivirus)的重要成员，根据抗原性不同分为 4个血清型(DENVⅠ-Ⅳ)。黄病毒属也包括西部尼罗河病毒、蜱传脑炎病毒、基孔肯尼亚热病毒、黄热病病毒和日本脑炎病毒等[1]。DENV 基因全长约 10.7kb，是单股正链 RNA 病毒，含单一的开放阅读框，依次编码三种结构蛋白和七种非结构蛋白（Non-structural protein，NS）。其结构蛋白包括衣壳蛋白（Capsid protein，C）、膜蛋白（Membrane Protein and its Precursorspr，M/PrM）和包膜蛋白（Envelopeprotein，E），非结构蛋白包括 NS1，NS2a，NS2b，NS3，NS4a，NS4b 和 NS5蛋白[2](图 1)。
大、白细胞数量减少等。登革出血热（dengue hemorrhagic fever，DHF）是 DF的一种严重类型，临床表现为高热、严重出血、休克、血小板计数减少、血液浓缩，病死率高。同时伴有休克表现的登革出血热称为登革休克综合征(dengueshock syndrome，DSS)[15]。1.2.2 登革热流行情况DF 主要通过埃及伊蚊（Aedes aegypti）和白纹伊蚊（Aedes albopictus）传播。DF 全球分布较广，大致以 10℃等温线为界，分布于热带及亚热带地区；多发于中南美洲、中部非洲、南亚及东南亚（图 2）[16]。据估计，全球有 128 个国家，大约 39.7 亿人有感染 DENV 的风险，约占世界人口的一半[17]。最近几十年，全球登革热的发病率急剧上升，估计每年有 3.9 亿人口感染，其中有 9600 万人被确诊为不同严重程度的登革热，超过 12 万死亡[18]。
硕士学位论文 抗登革病毒药物体外筛选模型的建立及 FNC 抗登革病毒的体内外8 年，中国大陆共报告登革热 655324 例，造成 610 人死亡[19]。据监测系统统计中国从 2009 年到 2014 年，发病率范围为每 10 万人-3.4581，通报 52749 例登革热病例和 6 例死亡病例（图 3）[20]。近建、浙江、云南、台湾等地区也分别发生暴发流行，并且有输入性呈逐年増多的趋势。这些暴发造成了巨大的社会经济负担。
【参考文献】
相关期刊论文 前3条
1 Jingjing Fan;Yi Liu;Zhiming Yuan;;Critical role of Dengue Virus NS1 protein in viral replication[J];Virologica Sinica;2014年03期
2 蔡俊荣;王裴;周旋;赵卫;;登革病毒感染动物模型研究进展[J];中国人兽共患病学报;2013年11期
3 刘媛媛,杨占秋,何静,石丽桥,肖红;MTT分析法、空斑减数法及CPE观察法评估药物体外抗病毒效果的比较与分析[J];武汉大学学报(医学版);2005年02期
本文编号：2861052
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