多西紫杉醇与藤黄酸联用抑制肺癌骨转移的研究

发布时间：2020-11-04 02:43

　　 肺癌是第一大癌种,每四个癌症患者中就约有一个肺癌患者。肺癌晚期容易发生骨转移,临床一般采用双膦酸盐类药物治疗。虽然双膦酸盐类药物减少了骨骼相关事件(骨折、脊髓受压等),但是并不延长生存期。临床急需有效治疗肺癌骨转移的新药。经文献调研,多西紫杉醇和的藤黄酸联用研究抗肺癌骨转移的活性,研究结果如下:1.体外MTT法测定多西紫杉醇和的藤黄酸联用对小鼠Lewis肺癌细胞LLC的抗肿瘤活性:经48h处理,多西紫杉醇(DTX)组、藤黄酸(GA)组和多西紫杉醇和藤黄酸联用组的 IC50值分别为 0.049 μM,0.073 和 0.035 μM(n=3,p0.01)。经 72h 处理,DTX组、藤黄酸组、DTX和GA联用组的IC50值分别为0.029 μM,0.051 μ和0.013 μM(n=3,p0.01)。实验结果表明DTX和GA联用组抗肿瘤活性优于DTX组或GA组,且随着时间的延长,药物的药效增强。2.以C57BL/6小鼠Lewis肺癌骨转移为模型,肺癌骨转移模型分为4组,分别为空白组、DTX组、GA组和DTX和GA联用组,腹腔注射给药,DTX剂量为10 mg/kg,GA剂量为4 mg/kg,连续给药10天,空白组小鼠整体生存期为19.27±1.32 d,DTX组整体生存期为25.75±0.67 d,GA组整体生存期为23.99±0.58 d,DTX和GA联用组为32.61±1.06d(n=10,p0.01),与DTX组或GA组比较,DTX和GA联用组小鼠生存时间明显延长。3.空白对照组小鼠平均体重为19.17±0.67g,DTX组小鼠平均体重为17.26±0.58g,GA组小鼠平均体重为16.88±0.65 g,DTX和GA联用组平均体重为18.33±0.62g(n=10,p0.01),DTX组和GA组体重均小于联合用药组,结果表明DTX和GA联用组毒性最小。4.根据小鼠瘤体积计算肿瘤抑制率,DTX组为60.35±2.79%,GA组为62.17±2.53%,DTX和GA联用组为69.54±3.11%,DTX和GA联用组肿瘤抑制率高于DTX组和GA组,结果表明DTX和GA联合用药对肿瘤的抑制作用强于DTX组或GA组。5.肺癌骨转移模型建立之后,观察各组小鼠胫骨经X线照射后骨破坏程度。小鼠腿骨肿瘤部位透射不均一,骨皮肥厚并断裂,骨皮呈现向肿瘤组织伸展的趋势。空白组骨破坏最严重,DTX组和GA组稍严重,与DTX组或GA组对比,DTX和GA联用组骨破坏较轻,结果表明联合用药发挥了更大的骨转移抗肿瘤作用。6.通过观察骨组织病理切片,空白组、DTX组和GA组骨瘤部位骨皮外膜消失,形成疏松状的骨瘤组织,骨小梁中细胞质萎缩,肿瘤细胞呈肥厚、不规则状态遍布于骨髓腔内,排布不规则。空白组骨破坏最为严重,DTX组和GA组稍严重,与DTX组和GA组对比,DTX和GA联用组可观察到清晰的骨皮和细胞质,骨破坏较轻。结果表明,联合用药组是更有效的抑制肺癌骨转移的抑制剂。在体内外活性实验初步确定了 DTX和GA联用具有抗肺癌骨转移的活性后,进一步通过Lewis肺癌细胞迁移和诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7形成破骨细胞实验,研究DTX和GA联用抗肺癌骨转移的机制,研究结果如下:1.小鼠Lewis肺癌细胞LLC的迁移情况如下:与空白对照组比较,DTX组细胞迁移抑制率为52.83±3.44%,GA组细胞迁移抑制率为46.22±4.17%,DTX和GA联合用药组细胞迁移抑制率为64.77士3.75%(n=3,p0.01)。结果表明DTX和GA联用可抑制小鼠Lewis肺癌细胞LLC的迁移,且抑制作用强于DTX组或GA组。2.小鼠Lewis肺癌细胞LLC和小鼠巨噬细胞RAW264.7,经TRAP染色后,与空白对照组相比,DTX组破骨细胞形成率为73.43%±2.97%,GA组破骨细胞形成率为86.12%±2.34%,DTX和GA联用组破骨细胞形成率为63.12±2.75%,结果表明,DTX和GA联用组破骨细胞形成率最低,可抑制小鼠Lewis肺癌细胞LLC诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7形成破骨细胞。由于DTX和GA水溶性差,静脉给药需添加有毒的助溶剂,本文通过高压均质乳化法制备了水溶性白蛋白包裹的DTX和GA纳米粒(DTX-GA-BSA-NPs),并以C57BL/6小鼠Lewis肺癌骨转移为模型,研究抗肺癌骨转移的活性,研究结果如下:1.制备DTX-GA-BSA-NPs,根据DTX标准曲线和GA标准曲线,测得DTX-GA-BSA-NPs 包封率为 86.3±2.4%,载药量为 8.7±1.2%,粒径为 102.0±18.64nm。2.DTX-GA-BSA-NPs作用于小鼠肺癌骨转移模型小鼠平均生存期为平均生存期为31.58±1.87d,DTX和GA联用组平均生存期为32.61±1.06d,DTX和GA联用组平均体重为 18.33±0.62 g,DTX-GA-BSA-NPs 组平均体重为 18.86±0.88 g,DTX 和 GA 联用组体重均小于DTX-GA-BSA-NPs组,差异有统计学意义(n=10,p0.01)。试验结果表明DTX-GA-BSA-NPs对小鼠的毒副作用较联合用药组小,DTX-GA-BSA-NPs对肺癌骨转移模型生存期延长是有显著效果的。总结:金氏公式计算结果为q=1.17,(q≥1.15时表示两种药物有协同作用),结果表明,DTX和GA联用对治疗肺癌骨转移有协同作用,且抗癌活性高于DTX和GA单一用药。
【学位单位】：东北林业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R96
【部分图文】：

Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｈｅ?ｓｕｒｖｉｖａｌ?ｋｉｎｅｔｉｃｓ?ｏｆ?ｅａｃｈ?ｇｒｏｕｐ??２．５．１．２体重和肿瘤体积观察??观察小鼠健康情况，造模后小鼠体重变化曲线如图２－２所示，小鼠体重从第８ｄ幵始??下降，空白组小鼠的体重减轻较慢，ＧＡ组小鼠体重减轻最快，ＤＴＸ与ＧＡ联用组小鼠??体重减轻最慢。空白对照组小鼠平均体重为１９．１７ｇ±０．６７?ｇ，ＤＴＸ组小鼠平均体重为??１７．２６ｇ±０．５８?ｇ，ＧＡ组小鼠平均体重为１６．８８ｇ土０．６５?ｇ，?ＤＴＸ和ＧＡ联用组平均体重为??１８．３３ｇ±０．６２ｇ，?ＤＴＸ组和ＧＡ组体重均小于联合用药组，差异有统计学意义（Ｐ＝〇．〇１９，??ｐ＝０．０１４，?＊ｐ＜０．０５），ＤＴＸ、ＧＡ对小鼠的毒副作用均高于联合用药组，本试验结果说??明ＤＴＸ与ＧＡ联用对小鼠的毒副作用最小。??，?空白对照组??多西紫杉醇沮??２１?＿?Ｔ＿?ｉ?１?藤黄酸组??Ｉ?多西紫杉醉藤黄酸联用组??Ｓ：??１６－?１??＂ｋ???１?＇?Ｉ?＇?Ｉ?１?Ｉ?１??〇?１０?２０?３０??Ｔｉｍｅ?（ｄａｙ）??图２－２造校后小鼠体１变化曲线??Ｆｉｇ．?２－２?Ｔｈｅ?ｗｅｉｇｈｔ?ｃｈａｎｇｅ?ｃｕｒｖｅ?ａｆｔｅｒ?ｍｏｄｅｌｉｎｇ??－１２－??

１０?１２?１４?１６?１８?２０?２２?２４?２６?２８?３０?３２?３４??时间（ｄ）??图２－１各姐小鼠生存期??Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｈｅ?ｓｕｒｖｉｖａｌ?ｋｉｎｅｔｉｃｓ?ｏｆ?ｅａｃｈ?ｇｒｏｕｐ??２．５．１．２体重和肿瘤体积观察??观察小鼠健康情况，造模后小鼠体重变化曲线如图２－２所示，小鼠体重从第８ｄ幵始??下降，空白组小鼠的体重减轻较慢，ＧＡ组小鼠体重减轻最快，ＤＴＸ与ＧＡ联用组小鼠??体重减轻最慢。空白对照组小鼠平均体重为１９．１７ｇ±０．６７?ｇ，ＤＴＸ组小鼠平均体重为??１７．２６ｇ±０．５８?ｇ，ＧＡ组小鼠平均体重为１６．８８ｇ土０．６５?ｇ，?ＤＴＸ和ＧＡ联用组平均体重为??１８．３３ｇ±０．６２ｇ，?ＤＴＸ组和ＧＡ组体重均小于联合用药组，差异有统计学意义（Ｐ＝〇．〇１９，??ｐ＝０．０１４，?＊ｐ＜０．０５），ＤＴＸ、ＧＡ对小鼠的毒副作用均高于联合用药组，本试验结果说??明ＤＴＸ与ＧＡ联用对小鼠的毒副作用最小。??，?空白对照组??多西紫杉醇沮??２１?＿?Ｔ＿?ｉ?１?藤黄酸组??Ｉ?多西紫杉醉藤黄酸联用组??Ｓ：??１６－?１??＂ｋ???１?＇?Ｉ?＇?Ｉ?１?Ｉ?１??〇?１０?２０?３０??Ｔｉｍｅ?（ｄａｙ）??图２－２造校后小鼠体１变化曲线??Ｆｉｇ．?２－２?Ｔｈｅ?ｗｅｉｇｈｔ?ｃｈａｎｇｅ?ｃｕｒｖｅ?ａｆｔ

?肺癌骨转移模型建立８?ｄ－１０ｄ后，各组小鼠可观察到肿瘤的形成，接种处可触摸到??肿块，肿块随时间增加逐渐增大，肿瘤生长曲线如图２－３所示。ＤＴＸ组和ＤＴＸ和ＧＡ联??用组肿瘤生长较缓慢，四组小鼠肿瘤体积差异均有统计学意义（Ｐ均小于〇．〇５）。ＤＴＸ??和ＧＡ联用组小鼠肿瘤体积明显小于ＤＴＸ组和ＧＡ组，ＤＴＸ组肿瘤抑制率为６０．３５土??２．７９％，ＧＡ?组为?６２．１７±２．５３％，ＤＴＸ?和?ＧＡ?联用组为?６９．５４±３＿１１％，并且?ＤＴＸ?和?ＧＡ??联用组小鼠肿瘤体积较ＤＴＸ组更小，两组间差异显著（ｐ＝〇＿〇〇７，?＊ｐ＜０．０１）。结果表明??ＤＴＸ和ＧＡ联用组肿瘤抑制作用高于ＤＴＸ组和ＧＡ组。??一＊一空白对照组??８－，?一＿一多西紫杉醇组??藤黄酸组??■?｜?多西紫ｇ醇藤黄酸联用组???１?｜?１?Ｉ?１?Ｉ??０?１０?２０?３０??时间（ｄ）??图２－３造模后小鼠肿瘤生长曲线??Ｆｉｇ．?２－３Ｔｈｅ?ｔｕｍｏｒ?ｇｒｏｗｔｈ?ｃｕｒｖｅ?ａｆｔｅｒ?ｍｏｄｅｌｉｎｇ??２．５．２生存期测定结果??通过观察Ｃ５７ＢＬ／６小鼠的死亡时间，采用ｓｐｓｓ?１７．０软件中Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ法进行生存??期分析，小鼠平均生存期如表２－３所示，小鼠生存曲线如图２－４所示。ＤＴＸ和ＧＡ联用??组平均生存期较空白组、ＤＴＸ组和ＧＡ组均有延长
【参考文献】

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本文编号：2869489