双去甲氧基姜黄素对肥大细胞介导的过敏性疾病的作用及其机制研究

发布时间：2020-11-05 00:47

　　 过敏性疾病是机体受到抗原刺激引起的组织功能紊乱的病理性免疫反应,最终导致炎症以及组织损伤,具有发作迅速、反应强烈等特点。肥大细胞在过敏性疾病的发生中发挥着重要的作用,当抗原重复攻击机体时,抗原被抗原递呈细胞处理后递呈给B细胞,促使B细胞分泌抗原特异性IgE抗体,其能够与肥大细胞表面的受体FCεRI结合,导致过敏反应发生。目的:探究双去甲氧基姜黄素对DNP-IgE/HSA诱导的肥大细胞系RBL-2H3细胞脱颗粒的影响;对OVA诱导的小鼠过敏性鼻炎模型、Compound 48/80诱导的小鼠过敏性休克模型、OVA诱导的小鼠主动性系统免疫性疾病模型的影响。方法:体外实验:1.建立DNP-IgE/HSA诱导的RBL-2H3细胞脱颗粒模型探究不同细胞密度、DNP-IgE浓度、DNP-IgE刺激时间、DNP-HSA浓度对RBL-2H3细胞脱颗粒模型建立的影响。2.探究姜黄素类化合物对RBL-2H3脱颗粒模型的细胞活力的影响使用上述步骤确定的最佳刺激条件,确定姜黄素类化合物(姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素)各剂量组对DNP-IgE/HSA诱导的RBL-2H3细胞脱颗粒模型细胞增殖能力的影响。3.探究姜黄素类化合物对RBL-2H3脱颗粒模型脱颗粒程度的影响(1)使用上述步骤确定的最佳刺激条件,确定姜黄素类化合物(姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素)各剂量组对DNP-IgE/HSA诱导的RBL-2H3细胞脱颗粒模型释放脱颗粒标志物β-氨基己糖苷酶(β-HEX)的影响。(2)使用甲苯胺蓝染色法观察上述受试物对细胞脱颗粒程度的影响。(3)使用鬼笔环肽对细胞膜进行染色,观察受试物对细胞膜重构的影响。体内实验:1.对OVA诱导的小鼠过敏性鼻炎模型的影响(1)观察每天攻击后小鼠的抓鼻次数。(2)收集血清,测定其中OVA特异性IgE水平。(3)制作病理切片,分别使用HE、甲苯胺蓝染色,观察鼻黏膜组织学改变及肥大细胞脱颗粒程度。2.对Compound 48/80诱导的小鼠过敏性休克模型的影响腹腔给予Compound 48/80后,观察75min内各组别小鼠的存活率。3.对OVA诱导的小鼠主动性系统免疫疾病模型的影响最后一次攻击后,测定80min内各组别小鼠直肠温度变化。结果:体外实验:1.DNP-IgE/HSA诱导的RBL-2H3细胞脱颗粒模型的建立最终确定实验条件为:将RBL-2H3以6×10~5个/mL铺于48孔板,贴壁过夜后,弃去上清,加入100ng/mL的DNP-IgE刺激12h后,弃去上清,加入250ng/mL的DNP-HSA激发1h后,冰浴10min终止反应,300×g离心10min后,吸取上清50μL加入底物50μL作用1.5h后,测定405nmOD值。2.对RBL-2H3脱颗粒模型的细胞活力的影响姜黄素类化合物(姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素)的各剂量组(6.3μM~73μM)均未降低DNP-IgE/HSA诱导的RBL-2H3细胞脱颗粒模型的细胞活力。3.对RBL-2H3脱颗粒模型脱颗粒程度的影响(1)对肥大细胞脱颗粒标志物β-HEX水平的影响姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素各剂量组均能够一定程度的降低β-HEX释放率(OD405nm)。经计算,抑制RBL-2H3细胞释放β-HEX IC50分别为姜黄素99.47μM、去甲氧基姜黄素30.15μM、双去甲氧基姜黄素19.27μM。(2)对肥大细胞脱颗粒程度的影响双去甲氧基姜黄素能够抑制DNP-IgE/HSA诱导的RBL-2H3细胞形状的改变,并能够降低紫色颗粒的释放。(3)对肥大细胞膜重构的影响双去甲氧基姜黄素能够抑制DNP-IgE/HSA诱导的RBL-2H3细胞膜重构,进而抑制肥大细胞脱颗粒。体内实验:1.对OVA诱导的小鼠过敏性鼻炎模型的影响(1)双去甲氧基姜黄素能够显著抑制OVA诱导的过敏性鼻炎小鼠抓鼻次数(P0.05)。(2)双去甲氧基姜黄素能够显著降低OVA诱导的过敏性鼻炎小鼠血清中OVA特异性IgE水平(P0.05)。(3)双去甲氧基姜黄素能够显著抑制OVA诱导的过敏性鼻炎小鼠鼻黏膜组织学改变,及肥大细胞脱颗粒。2.对Compound 48/80诱导的小鼠过敏性休克模型的影响双去甲氧基姜黄素能够显著增加Compound 48/80诱导的过敏性休克模型小鼠的存活率(P0.05)。3.对OVA诱导的小鼠主动性系统免疫疾病模型的影响双去甲氧基姜黄素显著抑制OVA诱导的主动性系统免疫疾病小鼠的直肠温度降低(P0.05)。结论:1.姜黄素类化合物中,双去甲氧基姜黄素对IgE诱导的肥大细胞激活抑制作用最强,其能够显著降低肥大细胞的脱颗粒程度。2.双去甲氧基姜黄素抑制肥大细胞介导的过敏性疾病,包括OVA诱导的小鼠过敏性鼻炎、Compound 48/80诱导的小鼠过敏性休克以及抑制OVA诱导的小鼠主动性系统免疫疾病。
【学位单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R96
【文章目录】：
中文摘要
abstract
缩略词表
第1章 前言
    1.1 过敏性疾病概述
    1.2 肥大细胞与过敏性疾病
        1.2.1 肥大细胞的发育与分化
        1.2.2 肥大细胞的激活
        1.2.3 IgE介导的肥大细胞激活的分子机制
    1.3 抗过敏药物研究进展
        1.3.1 抗组胺药物
        1.3.2 肥大细胞稳定剂
        1.3.3 钙剂
        1.3.4 免疫抑制剂
        1.3.5 天然化合物
    1.4 姜黄素类化合物的研究进展
        1.4.1 抗肿瘤作用
        1.4.2 抗炎作用
        1.4.3 抗氧化作用
        1.4.4 神经保护作用
        1.4.5 保护肺损伤
        1.4.6 抗代谢性疾病
        1.4.7 肝保护作用
        1.4.8 抗过敏作用
第2章 DNP-IgE/HSA诱导RBL-2H3脱颗粒模型的建立
    2.1 材料
        2.1.1 细胞
        2.1.2 试剂及药物
        2.1.3 主要仪器
    2.2 方法
        2.2.1 细胞浓度的确定
        2.2.2 DNP-IgE致敏条件的确定
        2.2.3 DNP-HSA攻击条件的确定
        2.2.4 统计学分析
    2.3 结果
        2.3.1 DNP-IgE致敏条件的确定
        2.3.2 DNP-HSA致敏条件的确定
第3章 姜黄素类化合物对DNP-IgE/HSA诱导RBL-2H3脱颗粒模型的影响
    3.1 材料
        3.1.1 细胞
        3.1.2 试剂
        3.1.3 主要仪器
        3.1.4 实验药品
    3.2 方法
        3.2.1 对脱颗粒模型的细胞活性的影响
        3.2.2 对细胞脱颗粒模型β-HEX释放率的影响
        3.2.3 对细胞脱颗粒模型脱颗粒程度的影响。
        3.2.4 对细胞膜重构的影响
        3.2.5 统计学分析
    3.3 结果
        3.3.1 对脱颗粒模型的细胞活性的影响
        3.3.2 对脱颗粒模型β-HEX释放率的影响
        3.3.3 对细胞脱颗粒模型脱颗粒程度的影响。
        3.3.4 对细胞膜骨架F-actin重构的影响
第4章 双去甲氧基姜黄素对肥大细胞介导的过敏性疾病的影响
    4.1 材料
        4.1.1 动物
        4.1.2 试剂
        4.1.3 主要仪器
        4.1.4 实验药品
    4.2 方法
        4.2.1 OVA诱导的过敏性鼻炎
        4.2.2 Compound48/80诱导过敏性休克
        4.2.3 OVA诱导的主动性系统免疫疾病
        4.2.4 统计学分析
    4.3 结果
        4.3.1 对OVA诱导的过敏性鼻炎的影响
        4.3.2 对Compound48/80诱导过敏性休克的影响
        4.3.3 对OVA诱导的主动性系统免疫疾病的影响
    结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 王化龙;李振虎;徐砚通;;中药治疗过敏性疾病的药理作用研究进展[J];中草药;2015年10期

2 Masashi Kanai;;Therapeutic applications of curcumin for patients with pancreatic cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2014年28期

本文编号：2870857